Scientific journal
Advances in current natural sciences
ISSN 1681-7494
"Перечень" ВАК
ИФ РИНЦ = 0,653

Метод гибридизации соматических клеток является одним из перспективных биотехнологических подходов, который находит все более широкое применение в вирусологии и биотехнологии.

В лаборатории клеточной биотехнологии была получена гибридная культура клеток А4хL (почка свиньи ТК- х лимфоциты лошади), состоящие из популяций эпителиоподобного и лимфоцитоподобного типов клеток. Сроки формирования монослоя 3-4 сутки, индекс пролиферации составил - 7,3-8,1, митотический индекс - 30‰. Модальный класс хромосом клеток гибридной культуры А4хL составлял 40 на 20 пассаже. Интервал изменчивости хромосом в клетках на 20 пассаже 30-40 хромосом.

Гибридные клетки А4хL высоко чувствительны к вирусу герпеса лошадей и ринопневмонии лошадей.

После 16 летнего хранения в жидком азоте восстановлена культура клеток А4хL, заложенная на 10 пассаже. На данный период культура прошла 40 пассажей. Жизнеспособность клеток на 0 пассаже составила 80%. Через 4-5 пассажей восстановлены культурально-морфологические показатели: монослой формировался на 3-4 сутки, коэффициент пересева 1:7-1:8, индекс пролиферации 7,25-8,1.

На цитологических препаратах культура представлена клетками двух типов - эпителиоподобными и лимфоцитоподобными.

Эпителиоподобные клетки полигональной формы, ядра клеток крупные неправильной формы, ядерная мембрана утолщена, количество ядрышек 1-2. Наблюдаются двуядерные клетки. Модальный класс хромосом на 20 пассаже представлен 38 хромосомами, что составляет 51% от общего числа. В процессе стационарного культивирования часть клеток уходит в суспензию и образует конгломераты в питательной среде. Клетки, снятие со стекла и уходящие в суспензию были использованы для получения суспензионных клонов из опорозависимой культуры. Было поставлено 10 опытов с использованием различных питательных сред: ИГЛА МЕМ с 2 наборами аминокислот и витаминов, 199, Игла МЕМ, ДМЕМ и разной концентрации клеток в спинере и роллерных условиях.

В условиях роллерно - суспензионного культивирования, с использованием среды Игла МЕМ с двойным набором аминокислот и витаминов с добавлением сыворотки КРС 15-20%, а также глюкозы(4 гл) и глютамина (600 мкгмл), через двое суток наблюдали увеличение концентрации клеток в 5-6 раз. В суспензии живых клеток было 80%. Через трое суток культивирования наблюдали уменьшение живых клеток.

На цитологических препаратах наблюдали сохранение лимфоцитоподобных клеток.