Scientific journal
Advances in current natural sciences
ISSN 1681-7494
"Перечень" ВАК
ИФ РИНЦ = 0,653

Дендритные клетки представляют собой профессиональные антигенпредставляющие клетки (АПК), обладающие уникальной способностью индуцировать первичный иммунный ответ [Ardavin C. et al., 2001; Granucci F. et. al., 2002]. В настоящее время накоплены многочисленные экспериментальные и клинические данные об успешном применении клеточных вакцин на основе дендритных клеток в иммунотерапии онкологических и инфекционных заболеваний.

Целью настоящей работы явилось изучение возможности генерации дендритных клеток из клеток эмбриональной печени и костного мозга мышей линии СВА при использовании в качестве индуктора созревания коммерческого препарата TNF-α (Biosours, США) и бактериальной вакцины Иммуновак ВП-4 (содержащей липополисахарид (ЛПС), ассоциированный с белком наружной мембраны грамотрицательных микроорганизмов, пептидогликан, тейхоевые кислоты и лабильные белковые компоненты; Россия).

Печень эмбрионов мышей гомогенизировали в среде RPMI 1640 (ICN, USA), трижды осаждали центрифугированием (250 g, 5 мин) и переводили в обогащенную среду культивирования затем добавляли мышиные рекомбинантные гранулоцитарно макрофагальный  колониестимулирующий  фактор  (GMCSF) и интерлейкин-4 (IL-4) (Biosource, USA). На шестые сутки в культуру вносили TNF-α (100 нг/мл) или ВП-4 (50 и 100 мкг/мл) для индукции созревания ДК, и на 9 сутки собирали полученные клетки.

Цитотоксическую активность МЛ определяли на линии клеток YAC-1 при помощи МТТ-теста, являющегося одним из основных нерадиометрических методов оценки жизнеспособности и пролиферативной активности клеток [De Maria R. et al., 1996]. Фенотип ДК исследовали с использованием моноклональных антител (Caltag Laboratories, США) против соответствующих антигенов на проточном цитометре FacsCalibur (Becton Dickinson, США).

Были получены ДК, характеризующиеся типичной морфологией и фенотипом CD34-, CD38+, CD40+, CD80+, CD86+, MHC I+, MHC II+, F4/80low. Обнаружена способность таких ДК стимулировать пролиферацию сингенных МЛ. При антигенной стимуляции ДК лизатом опухолевых клеток YAC-1 получены иммунные лимфоциты, обладающие высокой цитотоксичностью по отношению к клеткам линии YAC-1. Цитотоксичность лимфоцитов, стимулированных зрелыми ДК, нагруженными опухолевым антигеном клеток мышиной лимфомы возрастала в 2 раза по сравнению с лимфоцитами, стимулированными незрелыми ДК (c 43,00±2,33 до 82,27±3,30 %; P<0,05).

Результаты исследований свидетельствуют о возможности получения ДК из эмбриональных клеток при цитокиновой стимуляции GM-CSF и IL-4, и целесообразности использования TNF-α и поливалентной вакцины Иммуновак ВП4 в качестве фактораиндуктора созревания ДК. Дендритные клетки, пульсированные исследованными препаратами, могут служить основой для разработки ДК-вакцины с целью использования в биотерапии онкологических и инфекционных заболеваний.