Научный журнал
Успехи современного естествознания
ISSN 1681-7494
"Перечень" ВАК
ИФ РИНЦ = 0,736

РАЗЛИЧНЫЕ СПОСОБЫ ГИСТОЛОГИЧЕСКОЙ ПРОВОДКИ СЕЛЕЗЕНКИ

Родионова Е.А. 1
1 ГБОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения РФ

При микроскопическом исследовании лимфоидных тканей иорганов большое значение имеют техника взятия материала ипроведение последующих этапов гистологической проводки. Имеются некоторые особенности при изготовлении препаратов лимфоидных органов из-за их особой тканевой структуры.

Цель исследования: определить особенности проведения этапов гистологической проводки при изготовлении препаратов селезенки крыс.

Материалы иметоды. Изучению подверглись 6половозрелых белых крыс-самцов, масса которых составила 170– 250г. Экспериментальные животные поделены на 2группы. В1-ой группе селезенка крыс удаляли ирезали на кусочки диаметром до 1см. Укрыс 2-ой группы спленэктомия выполнялась сприменением специального приема– иссечение органа сзахватыванием капсулы.

Фиксация проводилась вформалине без предварительного промывания вводе. Объем фиксирующей жидкости превосходил объем фиксирующего материала в30раз при комнатной температуре, втечение 24часов.

Промывка материала проводилась под проточной водой втечение 8часов. Целую, инкапсулированную селезенку иселезенку, порезанную кусочками, помещали впервую емкость (70 % спирт) на 24часа; затем– во 2-ю (96 % спирт) на 24часа; далее– в3-ю (96 % спирт) на 24часа ив 4-ю (100 % спирт)– на 2часа.

Фиксированные селезенки животных 2-ой группы только после обезвоживания разрезали на кусочки 0,5– 1см ипомещали вхлороформ на 6часов, акусочки селезенки животных 1-й группы, разрезанные перед фиксацией, помещали вксилол на 3часа. Для постепенного илучшего пропитывания парафином кусочки селезенки из хлороформа переносили врасплавленную смесь хлороформа спарафином иоставляли втермостате при температуре 38градусов на 2часа. При работе сксилолом кусочки органов переносили всмесь ксилола спарафином на 2часа при температуре 38градусов. Смесь хлороформа/ксилола спарафином готовили из равных объемных частей просветлителя ипарафина, для чего парафин предварительно растапливали.

Дальше материал дважды заливали разным по структуре парафином. Первая заливка произведена Парафином-1(грубокристаллическая белая масса) на 2часа втермостате при температуре 64градуса. Вторая заливка выполнялась Парафином-2(полупрозрачная аморфная гомогенная масса) на 2часа при температуре втермостате 64градуса. Работа вдвух порциях парафина обусловлена необходимостью тщательного освобождения объекта от хлороформа/ксилола, примесь которого изменяет пластичность парафина, делая его крошковатым.

Для проводки селезенки крыс 2-ой группы использовали определенный метод заливки: побывавшие кусочки во втором парафине помещали вформочки, предварительно смазанные глицерином иразогретые на спиртовке до температуры 60– 70градусов. Исследуемый материал из второго парафина, не вынимая из термостата, горячим анатомическим пинцетом быстро перекладывали вформочку изаливали чистым Парафином-2врасплавленном состоянии. Толщина слоя парафина над уровнем кусочков составила 1см. Когда парафин достаточно затвердевал, его извлекали из формочки, подрезая края иформируя блоки.

Парафиновые блоки наклеивали на деревянные колодки той стороной, на которой больше парафина спомощью горячего шпателя. На следующем этапе шаг микротома устанавливался на отметке 5мкм. Для того чтобы срезы прочно пристали кпредметному стеклу ине отклеились во время окраски, стекла обезжиривались ипокрывались адгезивной средой. Окраска препаратов проводилась обычным способом гематоксилин-эозином. Различий впроведении этого этапа между 2-мя группами не было.

Результаты иих обсуждение. Микроскопирование полученных препаратов установило следующее. Впрепаратах 1-ой группы ткань органа имела рваные дефекты, границы белой пульпы селезенки четко не определялись. Препараты селезенки крыс 2-ой группы были практически без разрывов, достаточно хорошо определялась граница между белой икрасной пульпой. Полученные результаты обусловлены следующим:

Перед фиксацией органы крыс 1-й группы сразу разрезались на мелкие кусочки, аселезенки крыс 2-ой группы подвергались гистологической проводке инкапсулированными. Проникновение фиксатора через капсулу происходит бережнее всравнении сразрезанным материалом иобеспечивает сохранность структур органа.

Заливка материала №2вокончательный парафин произведена щадящим способом– вформочку, предварительно смазанную глицерином.

Использование хлороформа, хотя иболее длительное по времени, более бережно удаляет спирт ирастворяет парафин, минимально изменяя структуру ткани.

Выводы. Полученные результаты позволяют сделать заключение отом, что изготовление препаратов лимфоидных органов, вчастности селезенки, требует соблюдения некоторых особенных условий ианалогов сред, для того чтобы добиться максимального результата. Наилучшие результаты продемонстрировал специальный метод заливки: кусочки ткани селезенки следует помещать впарафиновые формочки, предварительно смазанные глицерином иразогретые на спиртовке до температуры 60–70градусов. Исследуемый материал, не вынимая из термостата, горячим анатомическим пинцетом следует переложить вформочку изалить чистым парафином врасплавленном состоянии. При затвердевании парафина его следует извлечь из формочки, подрезая края иформируя блоки.


Библиографическая ссылка

Родионова Е.А. РАЗЛИЧНЫЕ СПОСОБЫ ГИСТОЛОГИЧЕСКОЙ ПРОВОДКИ СЕЛЕЗЕНКИ // Успехи современного естествознания. – 2014. – № 6. – С. 57-58;
URL: http://natural-sciences.ru/ru/article/view?id=33732 (дата обращения: 22.10.2019).

Предлагаем вашему вниманию журналы, издающиеся в издательстве «Академия Естествознания»
(Высокий импакт-фактор РИНЦ, тематика журналов охватывает все научные направления)

«Фундаментальные исследования» список ВАК ИФ РИНЦ = 1.074