Научный журнал
Успехи современного естествознания
ISSN 1681-7494
"Перечень" ВАК
ИФ РИНЦ = 0,775

CD95 КАК ФАКТОР, НАРУШАЮЩИЙ ФЕРТИЛЬНОСТЬ СПЕРМЫ

Плосконос М.В. 1, 2
1 ГБОУ ВПО «Астраханский государственный медицинский университет» Минздрава России
2 ФГБОУ ВО «Волжский государственный университет водного транспорта»
Проведено исследование экспрессии маркёра апоптоза СD95 на сперматозоидах 78 субфертильных мужчин, и выявлена взаимосвязь с морфофункциональными параметрами спермы. Экспрессию СD95 определяли моноклональными антителами с последующей флюоресцентной микроскопией. У 53 % исследованных субфертильных мужчин более 10 % сперматозоидов в эякуляте оказались СD95-положительными (СD95+). В эякулятах субфертильных мужчин количество СD95+ сперматозоидов коррелирует с концентрацией, подвижностью и дефектами морфологии сперматозоидов, что позволяет считать экспрессию СD95 фактором, снижающим фертильность спермы.
апоптоз
СD95(Fas)
сперматозоиды
фертильность
Мойбенко А.А., Досенко В.Е., Нагибин В.С. Ферментативные механизмы апоптоза // Пат. физиол. и экспер. терапия. – 2005. – № 3. – С. 17–26.
Плосконос М.В. Роль маркёров апоптоза Fas и FasL в сперматогенезе // Урология. – 2012. – № 1. – С. 77–80.
Плосконос М.В. Методы определения апоптоза сперматозоидов (Обзор литературы) // Клин. лаб. диаг. – 2013. – № 4. – С. 3–8.
Плосконос М.В., Николаев А.А. Влияние полиаминов на апоптоз лимфоцитов периферической крови человека in vitro // Гемат. и трансфузиол. – 2010. – Т. 55, № 4. – С. 16–19.
Плосконос М.В., Николаев А.А. Апоптоз и мужская фертильность // Врач. – 2014. – № 3. – С. 23–25.
Плосконос М.В., Николаев А.А. «Абортивный» апоптоз сперматозоидов: какова его доля в эякуляте фертильного мужчины // Пробл. репрод. – 2014. – Т. 20, № 6. – С. 70–75.
Руководство ВОЗ по лабораторному исследованию эяку­лята человека и взаимодействия сперматозоидов с церви­кальной слизью. Пер. с англ. Р.А. Нерсеяна под научн. ред. рус. перевода Л.Ф. Курило. 4-е изд. – М: Изд-во «МедПресс», 2001.
Loginov P.V., Teply D.L. Morphofunctional state of reproductive system in male rats under conditions of immobilization stress // Естественные науки. – 2014. – № 4(49). – С. 47–54.
Perticarari S. et al. Отсутствие рецептора Fas на поверхности сперматозоидов в эякуляте // В журнале Пробл. репрод. – 2008. – № 5. – С. 100.
Sakkas D., Moffatt O., Manicardi G.C. et al. Nature of DNA damage in ejaculated human spermatozoa and the possible involvement of apoptosis // Biol. Reprod. – 2002. – Vol. 66. – Р. 1061–1067.

Цикл жизни многих типов клеток, в том числе и сперматозоидов, может зависеть от присутствия факторов смерти, которые могут активизировать суицидную программу – программу гибели клетки – апоптоз. Ключевой молекулой запуска процесса апоптоза является клеточный рецептор СD95(Fas) – поверхностный белок мембраны клеток, который используется при управлении апоптозом в течение сперматогенеза у множества разновидностей млекопитающих и у человека [2]. Однако экспрессия рецептора апоптогенного сигнала СD95 на клетках свидетельствует лишь о потенциальной готовности клетки при наличии дополнительных факторов к рецепторному апоптозу, но не является доказательством апоптоза [3, 8].

Данные литературы о наличии на поверхности сперматозоидов маркёра апоптоза СD95 довольно противоречивы: одни исследователи выявляют экспрессию СD95 на сперматозоидах фертильных и субфертильных мужчин, а другие – нет. Причиной этого могут быть различные методы определения рецептора, а также качество реагентов (например, применение разных антител для обнаружения СD95). Некоторые исследователи считают, что при различных нарушениях сперматогенеза наблюдается изменение экспрессии СD95 на сперматозоидах, отражая активность патологических процессов, протекающих в мужской репродуктивной системе. Кроме того, не многие исследователи пытались выявить корреляцию между экспрессией СD95 и некоторыми морфофункциональными характеристиками сперматозоидов [2, 9, 10].

Цель исследования

Таким образом, в мировой литературе к настоящему времени нет единого мнения исследователей по поводу экспрессии СD95 на половых клетках, что определило цель данного исследования, которая состояла в попытке выявить на поверхности сперматозоидов рецептор СD95 и обнаружить взаимосвязь между экспрессией этого маркёра апоптоза и морфофункциональными параметрами спермы.

Материалы и методы исследования

Для проведения исследования образцы эякулятов 78 субфертильных мужчин (33,5 ± 1,0 лет) были собраны мастурбацией в стерильные пластмассовые стаканчики. Сбор эякулятов производился после 72 ч сексуального воздержания. В течение 30 мин при комнатной температуре (22 °C) эякуляты были оставлены для разжижения, после чего каждый образец разделялся на две части: один для анализа морфо-функциональных параметров, другой для выявления на поверхности сперматозоидов экспрессии СD95.

Измерение показателей стандартной спермограммы проводили согласно рекомендациям и нормативам ВОЗ [7].

В качестве морфофункциональных характеристик качества спермы были выбраны двигательные и морфологические параметры, а также концентрация сперматозоидов в эякуляте.

Сперматозоиды выделяли из образцов эякулятов методом простого отмывания от семенной плазмы фосфатно-солевым буфером pH = 7,4.

Выявление экспрессии СD95 на клетках включало в себя обработку сперматозоидов соответствующими моноклональными антителами с последующей флюоресцентной микроскопией. Для этого использовали меченные фикоэритрином (РЕ) моноклональные антитела CD95 (CD95-РЕ, IgG1, Caltag Lbs.), согласно инструкции производителя.

Микроскопические исследования проводили на флюоресцентном микроскопе «МИКРОМЕД 3 ЛЮМ» (Санкт-Петербург) под иммерсионным объективом (×100).

Полученные результаты исследований обработаны с использованием программы «Statistica 7.0». О достоверности различий судили по величине t-критерия Стьюдента. Статистически достоверными считали различия, соответствующие оценке ошибки вероятности р ≤ 0,05. Оценка взаимосвязи исследуемых показателей осуществлялась подсчётом коэффициента корреляции (r) Пирсона.

Результаты исследования и их обсуждение

У 53 % (у 41 из 78) субфертильных мужчин более 10 % сперматозоидов в эякуляте оказались СD95-положительными (СD95+). При этом у 47 % обследованных мужчин этот антиген на сперматозоидах не выявлен.

Выявленная экспрессия СD95-антигена, вероятнее всего, произошла ещё в период сперматогенеза и эти маркированные клетки должны были быть устранены ещё тогда в процессе апоптоза, но, по каким-то причинам, механизмы апоптоза не были закончены, либо были отложены, либо функционировали неправильно – неполный апоптоз или «абортивный апоптоз» [6].

Анализ корреляции между процентным содержанием в эякулятах субфертильных мужчин СD95+ сперматозоидов и морфофункциональными характеристиками эякулятов, дал следующие результаты: обнаружена достоверная отрицательная корреляция между концентрацией сперматозоидов в эякуляте и количеством СD95+ сперматозоидов (r = – 0,46; p < 0,001); подвижность сперматозоидов положительно коррелировала с содержанием СD95+ клеток в сперме (r = 0,31; p < 0,05); выявлена положительная корреляция между числом СD95+ клеток и количеством атипичных форм сперматозоидов в эякуляте (r = 0,4; p < 0,01).

Таким образом, данные корреляционного анализа показывают, что часть тех сперматозоидов, которые оценены как активно подвижные у субфертильных пациентов, были маркированы СD95 и предрасположены при наличии дополнительных факторов к смерти через СD95-зависимый рецепторный апоптоз, что подтвердилось положительной корреляцией количества СD95+ клеток с подвижностью [4, 5].

Положительная корреляция СD95+ клеток с наличием в эякуляте атипичных форм сперматозоидов также свидетельствует о том, что эти клетки потенциально уготовлены к гибели по рецепторному пути апоптоза, когда сигналы к его запуску поступают извне и опосредованы через СD95-рецепторы [1].

Заключение

Полученные данные о достоверной связи между экспрессией рецептора апоптогенного сигнала СD95 и морфофункциональными характеристиками сперматозоидов убедительно показывают, что экспрессия СD95 на сперматозоидах, является фактором, снижающим фертильность спермы, что несомненно должно быть учтено при подготовке спермы для вспомогательных репродуктивных технологий.


Библиографическая ссылка

Плосконос М.В., Плосконос М.В. CD95 КАК ФАКТОР, НАРУШАЮЩИЙ ФЕРТИЛЬНОСТЬ СПЕРМЫ // Успехи современного естествознания. – 2015. – № 4. – С. 141-143;
URL: https://natural-sciences.ru/ru/article/view?id=35082 (дата обращения: 28.03.2024).

Предлагаем вашему вниманию журналы, издающиеся в издательстве «Академия Естествознания»
(Высокий импакт-фактор РИНЦ, тематика журналов охватывает все научные направления)

«Фундаментальные исследования» список ВАК ИФ РИНЦ = 1,674