В качестве объекта исследования использовались самцы белых лабораторных крыс, содержащиеся на стандартном режиме вивария. Для индукции апоптоза животным вводили актиномицин D внутрибрюшинно в дозе 20мкг на кг веса животного, а затем через 20 минут вводили ФНО-α (1мкг/кг) /1/.
Мелатонин вводили животным после индуцирования апоптоза внутрибрюшинно (2 мг/кг) троекратно с интервалов в 3 часа. Материал для исследований забирали через 12 часов после введения ФНО-α, что связано с максимальным уровнем развития свободнорадикальных процессов к этому времени /2/ . Активность НАДФ-ИДГ определяли на СФ-56 при длине волны 340 нм.
Нами было выявлено повышение активности НАДФ-ИДГ в гомогенате печени крыс при введении ФНО-α в 1,5 раза по сравнению с интактными животными. Введение мелатонина на фоне апоптоза приводило к снижению активности НАДФИДГ на 10% по сравнению с животными, которым вводили ФНО-α.
Изучение субклеточной локализации НАДФИДГ из печени всех исследованных групп показало, что активность фермента на 85% связана с цитоплазматической активностью, при этом на митохондриальную фракцию приходиться около 15% активности.
Электрофорез в ПААГ свидетельствует о том, что ферментные препараты НАДФ-ИДГ из печени крыс в норме, при введении ФНО-α и действии мелатонина, полученные после процедуры очистки фермента, финальной стадией которой являлась гельхромотография на Toyoperl HW-65, во фракциях с максимальной активностью, были гомогенны. Значения электрофоретической подвижности для НАДФ-ИДГ из печени крыс при проявлении на белок совпадали (Rf=0,55±0,02). Следует отметить, что значение Rf для полос, получаемых после специфического проявления НАДФ-ИДГ, из цитоплазматической фракции грубого тканевого экстракта совпадало с величиной Rf, обнаруженной при проявлении на белок.
Молекулярная масса НАДФ-ИДГ из печени крыс в норме, при патологии и действии гепатопротектора, определенная методом гельфильтрации через колонку с Toyopearl HW-65, составила 112 ±5,8 кДа.
При введении ФНО-α наблюдается уменьшение Кm по отношению к НАДФ + и Mn 2+ и увеличение Км по отношению к изоцитрату по сравнению с нормой. Введение мелатонина на фоне развития апоптоза способствует изменению значений Км для данного фермента по отношению к ИЦ, НАДФ + и Mn 2 в сторону контрольных параметров.
При исследовании зависимости активности НАДФ-ИДГ от концентрации ионов водорода выявлено смещение рН-оптимума в зону более кислых значений при развитии апоптоза. Однако при введении мелатонина на фоне развития апоптоза наблюдается тенденция к возрастанию данного параметра, тем самым введение мелатонина способствует приближению значений оптимальных рН к таковым в условиях нормы.
По-видимому, действие мелатонина на фоне развития апоптоза изменяет состояние свободно радикального гомеостаза за счет проявления его антиоксидантного свойства, что сказывается на величинах физико-химических параметров НАДФ-ИДГ из печени крыс по сравнению с данными при введении ФНО-a.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ:
- Effect of hepatocyte apoptosis induced by TNF-б on acute severe hepatitis in mouse models / Zang G.Q. [ et al.] // World J Gastroentero. -. 2000. - V. 6, №. 5. P. 688-692.
- Reiter R.J., Tan D.X., Qi W. Suppression of oxygen toxicity by melatonin// Acta Pharmacol. Sinica1998.-Vol.19.-P.575-581