Научный журнал

Успехи современного естествознания

ISSN 1681-7494

"Перечень" ВАК

ИФ РИНЦ = 0,775

• Авторы
• Резюме
• Файлы

Корхмазова С.А. Голубцов В.И. Тлиш М.М.

В работе проведены молекулярно-генетические исследования полиморфных вариантов гена HCR у больных псориазом Краснодарского края. Полученные результаты исследования двух SNP полиморфизмов (C325Т и C2327G) гена HСR у больных с семейными случаями псориаза русской этнической принадлежности (N = 100) и в соответствующей группе контроля (N = 93) позволяют сделать однозначный вывод, что ген HСR является кандидатным геном псориаза.

Статья в формате PDF

302 KB

Псориаз представляет собой мультифакториальное заболевание с преимущественно генетическим детерминированием, о чем свидетельствуют семейное накопление, многочисленные эпидемиологические и молекулярно-генетические исследования [1, 2, 5, 6, 10]. На сегодняшний день многие аспекты этиологии и патогенеза псориаза до сих пор остаются невыясненными. К настоящему времени установлено 9 локусов восприимчивости к псориазу (PSORS1-PSORS9), при этом локус PSORS1, расположенный на коротком плече 6-й хромосомы (6р21.3) является главным местом предрасположенности к псориазу, поскольку содержит несколько сцепленных генов, которые активно экспрессируются в эпителиальных кератиноцитах кожи [3, 6, 10]. Данный локус представляет собой область, на которой расположены, пять генов (HLA-C, TCF19(SC1), OTF3 (POUF5F1), HCR(Pg8), CDSN) два из которых (HCR и CDSN) проявляют выраженную ассоциацию с псориазом [5, 10, 8, 14], характер, которого не уточнен, что и определило необходимость проведения настоящего исследования.

Ген HCR (a-helix coiled-coil rod homolog gene), ранее называемый Pg8 ген, расположен на расстоянии 110 т.п.н. от гена HLA-C между генами корнеодесмозина (CDSN) и SC1.

Материалы и методы исследования

Материалом для исследования послужили образцы ДНК, выделенные методом фенол-хлороформной экстракции по Мэтью[9], из лейкоцитов венозной крови 100 больных псориазом и 93 здоровых индивида (контроль). Все обследованные являются жителями Краснодарского края, русской этнической принадлежности. В работе исследованы полиморфизмы С325Т и C2327G гена HCR последовательности которых взяты из компьютерной базы данных GDB (Genome Database http://gdb.org). Анализ полиморфных генов локуса PSORS1 проводили методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) на амплификаторе «Терцик» производства компании «ДНК-технология» с использованием ДНК-полимеразы Thermus aquaticus производства фирмы «Cилекс». После ПЦР синтеза ДНК, для выявления полиморфизмов генов HCR был проведен рестрикционный анализ, который оценивали при проведении электрофореза в 7 % ПААГ с последующим окрашиванием бромистым этидием и визуализации под ультрафиолетовыми лучами.

Математическую обработку результатов исследования проводили с помощью пакета программ статистического анализа «Rows x Columns», оценивающей значимость сравнений методом Монте-Карло, SPSS ver.13.0 for Windows, Statistica ver. 6.0 с анализом непараметрической корреляции Спирмена, хи-квадрат, простой линейной регрессии, а также вычисление показателей отношения шансов (Odds Ratio) и относительного риска (Relative Risk) и их доверительных интервалов (с поправкой Иэйтса на непрерывность), разработанной В.П. Леоновым [7].

Результаты исследования и их обсуждение

Результаты изучения полиморфизма C325Т гена HCR у больных псориазом показали, что в контрольной группе преобладал аллель *С, частота которого достигла 0,839, тогда как у больных псориазом аллели *С и *Т встречались С частотой 0,555 и 0,445, соответственно. Различия в распределении частот аллелей исследуемого полиморфизма между больными и контрольной группой достигают статистически достоверных значений (χ2 = 36,38, р << 0,001). Относительный риск псориаза для носителей аллеля *Т составил 4,169, что позволяет рассматривать его в качестве аллеля риска, тогда как аллель *С оказался протективным и для носителей этого аллеля риск развития псориаза понижен (OR = 0,24). По литературным данным существуют популяционные различия в распределении частот аллелей полиморфизма +325 (+269) гена HCR среди больных и здоровых индивидов из различных стран мира. У больных псориазом частота аллеля *Т варьирует от 0,24 в Испании до 0,54 в Британии, составляя 0,33 в Швеции, Италии и Индии и 0,27 в Финляндии [4]. В исследованной нами выборке больных русской этнической принадлежности частота аллеля *Т выше, чем в среднем по Европе (0,34). Среди здоровых индивидов из европейских популяций частота аллеля *Т также варьировала в широких пределах - от 0,08 у испанцев, до 0,27 у британцев [4], составляя 0,172 в среднем по Европе. В изученной нами контрольной группе здоровых доноров русской этнической принадлежности частота аллеля *Т (0,16) была близка к средней частоте такового в европейских популяциях. Интересно отметить, что, несмотря на популяционные различия, соотношение частоты аллеля *Т в группах контроля и больных псориазом из Европы достигало статистически значимых различий и риск развития заболевания у носителей аллеля *Т был повышен в 2-3 раза.

Нами также обнаружены статистически значимые различия в распределении частот генотипов полиморфизма +325 (+269) гена HCR у больных псориазом и контрольной группе. У больных псориазом самым частым оказался гетерозиготный генотип *С*Т (0,69), тогда как в контрольной группе преобладал генотип *С*С с частотой 0,699. В выборке больных также достоверно чаще встречался генотип *Т*Т по сравнению с контрольной группой (χ2 = 3,83*, р = 0,05). Относительный риск развития псориаза составил 5,736 для носителей генотипа *С*Т и 5,056 - при генотипе *Т*Т. При этом генотип *С*С оказался протективным и снижал риск псориаза (OR = 0,115). Полученные результаты подтверждают данные ряда авторов о значительной роли гена HCR в патогенезе псориаза и позволяют рассматривать его в качестве кандидатного гена псориза.

Таким образом, в результате исследований полиморфизма C325Т гена HCR обнаружены ассоциации полиморфных вариантов гена HCR с развитием псориаза. Маркерами повышенного риска развития заболевания являются: аллель *Т, генотипы *С*Т и *Т*Т гена HCR, маркерами пониженного риска псориаза - аллель *С и генотип *С*С гена HCR.

Анализ полиморфизма C2327G в 18 экзоне гена HCR у больных псориазом и в контрольной группе русской этнической принадлежности показал, что в группе больных частоты аллелей *С и *G оказались примерно одинаковыми, составляя 0,47 и 0,53, соответственно, тогда как в контрольной группе преобладал аллель *С, достигая 0,753. Относительный риск заболевания для аллеля *G составил 3,43, что позволяет рассматривать его в качестве аллеля повышенного риска развития псориаза, тогда как аллель *С оказался аллелем пониженного риска заболевания (OR = 0,29). По литературным данным нет однозначных данных о роли полиморфизма C2327G гена HCR в развитии псориаза. Обнаружены ассоциации аллеля *G с псориазом в популяциях испанцев и финнов, тогда как у итальянцев, шведов и в Индии не обнаружено достоверных отличий в распределении частот аллелей исследуемого локуса у больных по сравнению с контрольной группой [7]. В Италии частота аллеля *G оказался выше в контрольной группе (0,53), а у больных встречалась с частотой 0,47. В Индии частоты аллелей *G и *С была одинаковой как у больных так и у здоровых индивидов (по 0,35). В Швеции частота аллеля *G незначительно превышала частоту аллеля *С (0,38 и 0,30, соответственно) [4]. В исследованной нами выборке больных псориазом частота аллеля *G соответствовала частоте аллеля у больных из Британии (0,55).

Распределение частот генотипов исследуемого полиморфного локуса также достоверно отличалось в группе больных от таковой в контрольной выборке. У больных псориазом частота генотипа *С*G (0,64) преобладала по сравнению с генотипами *C*C и *G*G. В контрольной группе самым частым был генотип *С*С (0,548). Генотипы *С*G и *G*G являются генотипами повышенного риска заболевания, относительный риск составил 2,573 и 5,915, соответственно. Генотип *С*С определен как протективный (относительный риск - 0,145) и это позволяет считать, что для носителей генотипа *С*С риск развития псориаза снижен. Таким образом, при исследовании полиморфизма C2327G гена HCR обнаружены маркеры повышенного риска развития псориаза: аллель *G и генотипы *С*G и *G*G. Маркерами пониженного риска являются: аллель *С и генотип *С*С.

Заключение

Полученные результаты исследования двух SNP полиморфизмов C325Т и C2327G гена HСR у больных с семейными случаями псориаза русской этнической принадлежности и в контрольной группе позволяют сделать однозначный вывод, что ген HСR является кандидатным геном псориаза. Определение маркеров риска у членов одной семьи может определить тактику доклинических лечебно-профилактических мероприятий для предотвращения развития заболевания.

Список литературы

1. Кунгуров Н.В. Псориатическая болезнь. / Н.В. Кунгуров, Н.Н. Филимонкова, И.А. Тузанкина. - Екатеринбург: изд-во Уральского университета, 2002. - 200 с.
2. Мордовцев В.Н. Псориаз. / В.Н. Мордовцев, Г.В. Мушет, В.И. Альбанова. - Кишинев: Штиинца, 1991. - С. 186.
3. The major psoriasis susceptibility locus PSORS1 is not a risk factor for late-onset psoriasis / M.H. Allen, H. Ameen, C. Veal, J. Evans, V.S. Ramrakha-Jones, A.M. Marsland, A. David Burden, C.E.M. Griffiths, R.C. Trembath, J.N.W.N. Barker // J. Invest. Derm. - 2005. - Vol. 124. - P. 103-106.
4. Coding haplotype analysis supports HCR as the putative susceptibility gene for psoriasis at the MHC PSORS1 locus. / K. Asumalahti, C. Veal, T. Laitinen, S. Suomela, M. Allen, O. Elomaa, M. Moser, R. de Cid, S. Ripatti, I. Vorechovsky, J.A. Marcusson, H.Nakagawa and 9 others. // Hum. Molec. Genet. - 2002. - Vol. 11. - P. 589-597.
5. Asumalahti K. Molecular genetics of psoriasis // Аcademic dissertation. - Helsinki, 2003. - P.80.
6. Capon F. A synonymous SNP of the corneodesmosin gene leads to increased mRNA stability and demonstrates association with psoriasis across diverse ethnic groups. / F. Capon, M. Allen, M. Ameen, A.D. Burden, D. Tillman, J.N. Barker, R.C. Trembath // Hum. Mol. Genet. - 2004. - Vol. 13, №20. - P. 2361-2368.
7. Curtis D. Model-free linkage analysis using likelihoods / D. Curtis, P.C. Sham. // Am. J. Hum. Genet. - 1995. - Vol. 57 - P. 703-716.
8. Corneodesmosin gene polymorphism demonstrates strong linkage disequilibrium with HLA and association with psoriasis vulgaris / S. Jenisch, S. Koch, T. Henseler, R.P. Nair, J.T. Elder, C.E. Watts, E. Westphal, J.J. Voorhees, E. Christophers, M. Kronke // Tissue Antigens. - 1999. - Vol. 54. - P. 439-449.
9. Mathews S. The isolation of high molecular weight eucariotic DNA // Methods in Mol. Biology. - 1984. - Vol. 2. - P. 31-34.
10. The genetics of psoriasis--selected novelties in 2008 / A. Pasić, J. Lipozencić, R. Ceović, K. Kostović // Acta Dermatovenerol Croat. - 2009. Vol. l7, №3 - P. 176-181.

Библиографическая ссылка