Научный журнал
Успехи современного естествознания
ISSN 1681-7494
"Перечень" ВАК
ИФ РИНЦ = 0,778

ВЛИЯНИЕ ГРИБОВ РОДА CANDIDA НА СИНТЕЗ ЦИТОКИНОВ ИММУННЫМИ КЛЕТКАМИ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА IN VITRO

Поспелова А.В. Бурмистрова А.Л. Хомич Ю.С. Самышкина Н.Е. Бахарева Л.И.
Грибы рода Candida являются самыми распространенными возбудителями микотических заболеваний. Эта нозологическая форма является оппортунистической инфекцией, которая чаще возникает на фоне дисбаланса в иммунной системе организма, поэтому даже при наличии высокоактивных противогрибковых средств лечение кандидоза на фоне иммунодефицита не всегда бывает успешным. С возрастанием частоты встречаемости данного заболевания среди людей возрастает интерес к состоянию иммунной системы при кандидозах для выявления тех звеньев иммунной защиты, воздействие на которые могло бы способствовать успешному лечению. Важную роль в модуляции иммунного ответа играют цитокины, синтезируемые иммунными клетками. В настоящее время активно ведутся клинические и экспериментальные исследования, в которых исследуется цитокиновый профиль при кандидозах. Например, известно, что выработка цитокинов Тh1 типа (IL-12 и IFN-φ) коррелирует с эффективным излечением от кандидоза, а цитокины Тh2 типа (IL-4, IL-10) способствуют хронизации процесса и аллергизации организма. Отмечено, что у больных с рекуррентным вагинальным кандидозом наблюдался пониженный уровень продукции IFNgamma мононуклеарными клетками, стимулированными Candida albicans, а реакция на антигены Candida соответствовала 1 типу гиперчувствительности, что, как известно, отражает преобладание Th2 профиля. В подобных исследованиях тестируются на способность к синтезу цитокинов иммунные клетки людей, больных кандидозом, либо иммунная система животных при экспериментальной инфекции, вызванной грибами. Но уровень продукции цитокинов зависит не только от состояния иммунной системы, но и от самого стимулирующего фактора-индуктора, от его качественного и количественного состава. Поэтому целью нашего исследования является оценка влияния грибов рода Candida на выработку некоторых цитокинов (IL1α,,TNF-α, IL-4, IFN-γ) иммунными клетками периферической крови донора.

Материалыиметоды. В исследовании использовались 42 клинических штамма грибов рода Candida, полученных при микробиологическом обследовании пациентов с подозрением на кандидозный процесс. Данные штаммы культивировались 48 часов на среде Сабуро, дважды отмывались буферным раствором при центрифугировании (3000 об/мин в течение 15 мин). Для приготовления антигена грибные клетки прогревались при 80˚ С в течение 1 часа на водяной бане, для стимуляции цитокинопродукции использовалась суспензия, содержащая 10 в 7 степени кл/мл. При постановке использовалась цельная периферическая гепаринизированная кровь донора, разведенная средой RPMI 1640 с глутамином в соотношении 1:5. Кровь и грибной антиген в соотношении 1:1 помещались в иммунологический планшет. В качестве контроля (оценка спонтанной индукции) использовалась кровь с добавлением культуральной среды без грибного антигена. Планшеты инкубировались 72 часа (для IFN-gamma) и 24 часа (для остальных цитокинов) в условиях эксикатора (37˚С, 0,5 % СО2). После инкубации сняты супернатанты, разделены на малые порции и заморожены при -70˚ С. Определение количества цитокинов в супернатантах производилось методом ИФА с использованием специальных тестсистем (производство ЗАО «Вектор-Бест» г. Новосибирск, Россия, ООО «Цитокин» г. Санкт-Петербург, Россия).

Так как клетки крови при манипуляциях способны к спонтанной выработке цитокинов, при анализе результатов важно оценить не столько абсолютные значения содержания цитокинов в супернатантах, сколько отношение уровня индуцированной цитокинопродукции к уровню спонтанной.

Результаты. Средние значения производства выбранных цитокинов следующие содержание:

IL-1α в супернатантах

  • без индукции  (спонтанная продукция) - 2,22±0,1пг/мл,
  • под воздействием индукции грибами (индуцированная продукция) - 29,24 ± 7,56 пг/мл.,
  • соотношение  индуцированная/спонтанная -10,93±5,14

TNF-α :

  • спонтанная продукция 6,89±0,48 пг/мл
  • индуцированная - 180,43 ± 84,12 пг/мл
  • соотношение индуцированная / спонтанная 38,18±18,06

IL-4 :

  • спонтанная продукция - 2,59 ± 0,32 пг/мл
  • индуцированная - 4,49 ± 2,13 пг/мл
  • соотношение индуцированная/спонтанная 1,77±0,95

IFN-γ:

  • спонтанная продукция -1023,0 ± 0 пг/мл
  • индуцированная - 994,32 ± 25,86 пг/мл
  • соотношение индуцированная / спонтанная 0,97±0,07

Таким образом, при совместном культивировании клеток крови донора с антигеном, полученным из клинических штаммов грибов рода Candida, in vitro через 24 часа в супернатантах фиксируется активная наработка провоспалительных цитокинов (IL-1α, TNF-α) и низкий уровень противовоспалительного-IL4. Примечателен тот факт, что IFN-γ синтезируется слабо под воздействием грибного антигена даже через 72 часа.


Библиографическая ссылка

Поспелова А.В., Бурмистрова А.Л., Хомич Ю.С., Самышкина Н.Е., Бахарева Л.И. ВЛИЯНИЕ ГРИБОВ РОДА CANDIDA НА СИНТЕЗ ЦИТОКИНОВ ИММУННЫМИ КЛЕТКАМИ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА IN VITRO // Успехи современного естествознания. – 2006. – № 2. – С. 86-86;
URL: http://natural-sciences.ru/ru/article/view?id=14263 (дата обращения: 13.08.2020).

Предлагаем вашему вниманию журналы, издающиеся в издательстве «Академия Естествознания»
(Высокий импакт-фактор РИНЦ, тематика журналов охватывает все научные направления)

«Фундаментальные исследования» список ВАК ИФ РИНЦ = 1.074