Цель работы - исследование электронно - микроскопических особенностей ДК, генерированных из стволовых клеток печени мышиных эмбрионов и клеток-предшественников костного мозга половозрелых мышей при использовании различных индукторов созревания.
В качестве клеток-предшественников дендритных клеток были использованы стволовые клетки печени 11-дневных эмбрионов (30 животных) и клетки костного мозга (30 половозрелых особей) мышей линии СВА. В работе использовали коммерческие мышиные рекомбинантные цитокины: гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор (ГМ-КСФ), интерлейкин-4 (ИЛ-4), тумор - некротизирующий фактор-a (ТНФ-a). Печень эмбрионов мышей и костный мозг половозрелых особей гомогенизировали и переводили в полную культуральную среду, содержащую гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор и интерлейкин-4. На 6-е сутки производили смену среды с добавлением фактора некроза опухолей (TNF-a) для индукции созревания дендритных клеток, и на 9-сутки собирали полученные дендритные клетки. В результате коинкубации стволовых клеток печени мышиных эмбрионов и клеток-предшественников костного мозга половозрелых мышей с ГМ-КСФ и ИЛ-4 в течение 6 суток были получены незрелые ДК, после пульсации ТНФ-a- на 9-е сутки зрелые дендритные клетки, что было подтверждено данными иммунофенотипа генерированных клеток.
Для электронно-микроскопического исследования взвесь клеток фиксировали в 2% растворе глютаральдегида на 0,1 М фосфатном буфере и заключали в смолу эпон-аралдит по стандартной методике. Срезы получали на ультрамикротоме LKB-3 (LKB, Швеция) и контрастировали уранил ацетатом и цитратом свинца. Препараты просматривали и фотографировали в электронном микроскопе JEM- 100СХ (JEOL, Япония).
Электронно - микроскопические исследования показали, что зрелые дендритные клетки, генерированные из стволовых клеток эмбриональной печени и клеток-предшественников костного мозга, имели крупные размеры, овальную или неправильную форму с множественными разветвлёнными или булавовидными отростками, эксцентрично расположенное ядро с многочисленными инвагинациями, хроматином, сконцентрированным преимущественно по периферии, и крупными ядрышками. Цитоплазма содержала большое количество везикул разной величины и вакуоли, внутри которых выявлялось разнообразное содержимое. Зрелые дендритные клетки, полученные из клеток эмбриональной печени, имели более длинные и разветвлённые отростки и большее количество крупных вакуолей по сравнению с клетками костномозгового происхождения. В цитоплазме дендритных клеток и того, и другого вида были хорошо развиты синтетические органоиды: митохондрии, гладкая и гранулярная эндоплазматическая сеть, рибосомы, и аппарат Гольджи. Таким образом, наши исследования не выявили существенных различий в ультрамикроструктуре дендритных клеток, генерированных из стволовых клеток печени мышиных эмбрионов и клеток - предшественников костного мозга половозрелых мышей при цитокиновой стимуляции.