Исследование патогенетических закономерностей стрессорного повреждения организма и разработка принципов его коррекции составляет важное направление современной медицины и биологии. Одной из задач этого направления является исследование побочных эффектов лекарственных средств в условиях стресса. Ее актуальность оформилась в связи с результатами ранее проведенных работ [1, 8], продемонстрировавших принципиальную возможность моделирования итогов длительной антиаритмической терапии у кардиологических больных [10]. В связи с этим целью настоящего исследования явилось оценка фармакотоксикологических свойств этацизина и димефосфона в условиях хронического стресса по тестам летальности животных и их поведения в «открытом поле».
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.
Работа выполнена на 115 нелинейных белых мышах обоего пола массой 19-26 г. Животные были распределены на 4 группы. Мыши 1 группы (n=10) находились в условиях стандартного содержания (контроль 1). Животные 2 группы (n=38) подвергались хроническому стрессу (контроль 2). Животные 3 и 4 групп (n=32 и 35) помимо стресса получали соответственно димефосфон и этацизин.
Иммобилизационный стресс воспроизводили ежедневным помещением животных в тесные пеналы (объемом 42 мм3) на 6 часов. Длительность эксперимента составила 28 суток. Препараты вводили ежедневно внутрибрюшинно в объеме 0,1 мл в следующих дозах: этацизин - 0,5 мг/кг, димефосфон - 100 мг/кг. В контрольных сериях опытов вводили 0,1 мл 0,9 % раствора натрия хлорида. Дозы исследуемых препаратов соответствовали эффективным терапевтическим [2, 3, 6]. Ежедневно проводили учет смертности животных.
Тестирование животных (2-4 групп) в «открытом поле» проводили по методу [5, 9] до стресса, на 7-е, 14-е, 21-е и 28-е сутки после стресса. Регистрировали: число пройденных квадратов, латентный выход, число стоек, число выходов в центр (исследовательская активность) и грумминг. Статистическую обработку проводили методами χ2 и t-критерия Стьюдента.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.
На первом этапе работы мы провели оценку летальности животных (рисунок 1).
В первой контрольной серии гибели животных не было отмечено. В контрольной серии 2 смертность составила 31,6 %, причем гибель животных происходила с 8-х по 14-е сутки.
Этацизин вызвал гибель 54,3 % животных, что статистически выше (p<0,05) соответствующего показателя в контроле, причем гибель мышей наблюдалась с 1-х по 17-е сутки. Смертность на фоне введения димефосфона (31,3 %) оказалась близкой к летальности в контрольной серии 2. Динамика смертности мышей также существенно не отличалась от ее динамики в контроле 2. Таким образом, можно отметить отсутствие «летальногенного» эффекта у димефосфона по сравнению с этацизином.
На следующем этапе работы провели сравнительный анализ влияния этацизина и димефосфона на поведенческие реакции мышей при стрессе. Данные приведены в таблице 1.
Таблица 1
Влияние этацизина и димефосфона на динамику поведенческих реакций белых мышей при хроническом стрессе
|
Условия опыта, доза (мг/кг) |
Сутки |
Квадраты |
Стойки |
Грумминг |
Выход в центр |
Латентный выход |
|
Контроль 2 |
0 |
261,3±23,75 |
25,9±3,73 |
5,1±0,86 |
5,4±0,95 |
3,7± 0,38 |
|
7 |
136,8±20,54* |
4,3±1,43* |
8,7±1,16* |
1,4±0,41* |
9,8± 2,06* |
|
|
14 |
58,1±14,75* |
2,1±0,82* |
10,5±1,08* |
0,5±0,19* |
20,2± 4,49* |
|
|
21 |
83,4±15,34* |
3,8±1,31* |
10,5±1,32* |
1,4±0,42* |
27,6± 14,34 |
|
|
28 |
84,0±13,34* |
4,1±1,43* |
10,2±1,11* |
0,8±0,28* |
24,2± 10,51* |
|
|
Димефосфон, 100 |
0 |
284,8±33,67 |
26,9±4,13 |
5,7±1,19 |
5,6±1,02 |
4,0± 0,59 |
|
7 |
157,6±29,28*k |
7,7±2,39* |
7,9±1,11* |
2,9±0,94* |
8,8± 1,71* |
|
|
14 |
91,9±15,57*k |
2,6±0,77* |
7,4±1,03 |
0,5±0,19* |
7,0± 1,83k |
|
|
21 |
89,3±27,92* |
4,5±1,62* |
6,8±1,26 |
1,7±0,41* |
21,2± 0,83 |
|
|
28 |
85,6±15,98* |
4,6±1,60* |
6,6±0,98k |
1,1±0,35* |
37,4± 8,21 |
|
|
Этацизин, 0,5 |
0 |
256,5±30,62 |
26,3±3,96 |
5,2±1,21 |
5,5±0,74 |
3,9± ,91 |
|
7 |
78,9±13,48*kd |
3,1±1,06* |
9,4±1,70* |
0,4±0,19*kd |
10,8±2,97* |
|
|
14 |
30,9±6,76*d |
1,1±0,59* |
10,7±1,22* |
0,2±0,11* |
48,7±21,48 |
|
|
21 |
47,7±10,18* |
1,1±0,48* |
11,2±1,24*d |
0,7±0,32* |
47,3±22,74 |
|
|
28 |
53,3±8,52* |
1,5±0,63* |
11,9±1,49*d |
0,6±0,21* |
70,2±24,61* |
Примечания: * - отличия от исходных значений достоверны при p<0,05; k - отличия от соответствующего показателя в контроле достоверны при p<0,05; δ - отличия от соответствующего показателя в серии с димефосфоном достоверны при p<0,05.
В контрольной серии опытов, а также в группах животных, получающих этацизин и димефосфон, с 7-х по 28-е сутки стресса число пройденных квадратов достоверно снижалось по сравнению с исходными данными. Однако в группе димефосфона снижение этого показателя было достоверно менее значимым по сравнению с контролем на 7-е и 14-е сутки. Этацизин усиливал стрессопосредованную горизонтальную двигательную депрессию по сравнению с контролем на 7-е сутки и по сравнению с димефосфоном на 14-е сутки.
Во всех группах животных с 7-х по 28-е сутки стресса наблюдалось достоверное снижение числа стоек по сравнению с исходными данными. Достоверных отличий по выраженности данного показателя между 2, 3 и 4 группами животных не отмечали.
Под влиянием стресса у животных существенно возрастал грумминг. В группе, получающей этацизин, его увеличение сохранялось на всем протяжении опыта. На фоне терапии димефосфоном данный показатель достоверно увеличивался лишь на 7-е сутки, после чего наблюдалось его снижение и приближение к исходному уровню. Увеличение грумминга в группе этацизина было достоверно выше, чем в группе димефосфона на 21-е и 28-е сутки.
Во всех исследуемых группах (2 - 4) число выходов в центр поля достоверно снижалось с 7-х по 28-е сутки эксперимента. Этацизин более существенно уменьшал исследовательскую активность животных на 7-е сутки по сравнению с контролем. Достоверных отличий между 2 и 4 сериями опытов не наблюдалось.
В качестве дополнительного критерия для оценки двигательной активности животных использовали время латентного выхода из центрального сектора. Необходимо отметить, что при стрессе у незначительной части животных отмечается выпадение этого вида активности. В контроле у животных, сохранивших способность к выходу из центрального сектора, происходит достоверное увеличение времени выхода на 7, 14 и 28 сутки стресса. В группе димефосфона достоверное увеличение показателя происходило лишь на 7-е сутки, тогда как на 14-е сутки он был достоверно ниже, чем в контроле. Время латентного выхода на фоне терапии этацизином достоверно увеличивалось на 7-е и 28-е сутки эксперимента.
При сравнительном анализе динамики смертности и динамики поведенческих реакций можно отметить интересную особенность - максимальная смертность животных и депрессия поведенческих реакций в группах 2 - 4 наблюдались в сопоставимые сроки. В связи с этим можно предположить единство патогенетических механизмов общетоксического и нейротоксического действия стресса.
Таким образом, полученные нами данные о динамике летальности, грумминга, показателей двигательной и исследовательской активности животных в условиях стресса соответствуют данным литературы [1, 5, 8]. Результаты проведенных экспериментов свидетельствуют, что в условиях хронического стресса димефосфон в отличие от этацизина не оказывает общетоксического действия. Более низкие показатели смертности мышей на фоне терапии этацизином по сравнению с ранее проведенными исследованиями [1, 4] объясняется меньшей продолжительностью эксперимента. Кроме того, димефосфон либо оказывает протективное влияние на стрессопосредованные негативные изменения поведенческих реакций грызунов в тесте «открытое поле», либо не проявляет эффекта в отношении регистрируемых параметров. Напротив, для действия этацизина характерно усиление эффекта стресса.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
- Балашов В.П., Шеворакова Т.И., Седова Д.Г. и др. Влияние длительной противоаритмической терапии на смертность в условиях эксперимента./Тез. Докл. IV Международного славянск. конгресса по электростимуляции и клинической электрофизиологии сердца. С.-Петербург. 2000.//Вестник аритмологии. 2000. № 15. С. 94.
- Балыкова Л.А., Балашов В.П., Школьникова М.А., Кемаева Н.Н. Эффективность димефосфона при нарушениях ритма сердца у детей.//Российский вестник перинатологии и педиатрии. 1999. № 2. С. 35.
- Балыкова Л.А., Маркелова И. А., Балашов В.П., Котляров А.А. Эффективность димефосфона при синдроме слабости синусового узла у детей.//Казанский медицинский журнал. 2001. Т.82. № 6. С. 424.
- Балыкова Л.А., Балашов В.П., Подеров В.Н., Шеворакова Т.И., Седова Д.Г., Верещагина В.С., Курмышева Т.В., Маркелова И.А. Влияние длительной противоаритмической терапии на смертность животных и адренергическую регуляцию сердца в эксперименте.//Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины./Материалы II Российской конференции молодых ученых России с международным участием. М. 2001. Т. I. С. 261.
- Калуев А.В. Стресс, тревожность и поведение (актуальные проблемы моделирования тревожного поведения у животных). Киев: Энигма, 1998. 96 С.
- Машковский М.Д. Лекарственные средства. В двух частях. Ч. I. 12-е изд. М.: Медицина, 1993. 736 С.
- Панферова Н.Е. Гиподинамия и сердечно-сосудистая система. М: Наука, 1977. 259 С.
- Шеворакова Т.И. Фармакологические эффекты препаратов, обладающих противоаритмической активностью при длительном применении./Дисс. на соискание ученой степени канд. биол. наук. Саранск. 2000. 156 С.
- Gray J. The psychology of fear and stress.//Me Graw-Hill Book Co. NY. Toronto. 1974. 256 P.
- Teo K.K., Yusuf S., Furderg C.D. Effects of prophylactic antiar-rhythmic drug therapy in acute miocardial infarction. An overview of results from randomized controlled clinical trials.//JAMA 1993. V. 270. P. 1589.