МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.
Эксперименты проводились на 10 половозрелых кроликах, массой 2,5 - 3,0 кг., содержащихся в условиях вивария на стандартном рационе питания. Для воспроизведения лихорадки использовался пирогенал инъекционный, представляющий собой липополисахорид, выделенный из клеток Salmonella typhi, в фосфатносолевом буферном растворе [14]. Лихорадку воспроизводили однократным внутримышечным введением пирогенала животным в дозе 1 мкг/кг массы тела [14, 15] ректальную температуру измеряли до введения пирогенала и через 2, 4, 24, 48 часов после него электротермометром ТПЭМ1, ректальным электродом. Костный мозг получали под местной анестезией 2% раствором новокаина пункцией эпифизов бедренных и большеберцовых костей кроликов до инъекции пирогенала, через 2, 4, 24 и 48 часов после неё. Мазки аспиратов костного мозга кроликов, фиксированные смесью Никифорова, окрашивали по Романовскому-Гимзе. При подсчете миелограммы определяли вид кластерообразующих миелокариоцитов [9], подсчитывали количество эритроклазических кластеров, одновременно учитывали наличие или отсутствие в них экзоцитарного лизиса эритроцитов.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.
Ректальная температура интактных животных колебалась в пределах от 350С до 37,70С. Максимальный подъём наблюдался через 4 часа после введения пирогенала. Он составлял от 380С до 41,50С.
Установлено, что общее количество миелокариоцитов при лихорадке достоверно (Р<0,001) увеличивалось, по сравнению с их содержанием у животных до введения пирогенала. Так, до инъекции пирогенала количество миелокариоцитов в костном мозге кроликов было равным 86002±6333/мкл. Максимальное увеличение числа миелокариоцитов отмечалось через 24 часа после инъекции пирогенала и составило 179238±15759/мкл. (Р<0,001). При этом происходило достоверное (Р<0,001) нарастание содержания гранулоцитов всех стадий развития, макрофагов, лимфоцитов и нормоцитов. Следует отметить также появление в аспиратах костного мозга после инъекции пирогенала тромбоцитарных агрегатов; в косном мозге интактных животных они не обнаруживались [6]. Через 48 часов после инъекции пирогенала содержание миелокариоцитов уменьшилось (Р<0,001), по сравнению с их содержанием в костном мозге через 24 часа после инъекции пирогенала, и оно составило 58800±14075/мкл., что достоверно не отличалось от их содержания у интактных кроликов. При этом происходило достоверное (Р<0,001) уменьшение содержания в костном мозге миелобластов, промиелоцитов, нейтрофильных гранулоцитов, макрофагов, лимфоцитов, эритробластов и нормоцитов, также продолжалось увеличение (Р<0,001) содержания в аспиратах костного мозга тромбоцитарных агрегатов.
Одновременно с изменениями клеточного состава костного мозга наблюдалось изменение интенсивности образования эритроклазических костномозговых кластеров, и интенсивности происходящего в них экзоцитарного лизиса эритроцитов. Так, до введения пирогенала, общее содержание эритроклазических кластеров в костном мозге кроликов составляло 4061 ±121/мкл, их образовывали 4,7 ± 1,9% от общего количества миелокариоцитов. При этом эритроклазические кластеры были образованы, преимущественно, гранулоцитами. Из этих кластеров 396±98/мкл. были с экзоцитарным лизисом эритроцитов, что составляет 10±2,4% от общего содержания кластеров. После инъекции пирогенала происходило достоверное (Р<0,001) нарастание содержания общего количества эритроклазических кластеров в костном мозге кроликов, в том числе и их количества с экзоцитарным лизисом эритроцитов. Максимальное содержание эритроклазических кластеров (Р<0,001) в аспиратах костного мозга наблюдалось через 24 часа после введения пирогенала, оно составило 7706±2295/мкл. В этот период лихорадки эритроклазические кластеры были образованы 4,3±1,3% миелокариоцитов. Из этих кластеров 5668±1030/мкл были с экзоцитарным лизисом эритроцитов, что соответствует 73±13,4% от общего содержания кластеров. При этом эритроклазические кластеры, преимущественно, были образованы промиелоцитами, метамиелоцитами, нейтрофильными миелокариоцитами и макрофагами (Р<0,001). Через 48 часов после введения пирогенала общее количество костномозговых эритроклазических кластеров оставалось увеличенным, по сравнению с показателями, полученными до инъекции пирогенала (Р<0,001), и было равно 7488±2670/мкл, однако содержание кластеров с экзоцитарным лизисом эритроцитов уменьшалось (Р<0,001), по сравнению с их содержанием, наблюдавшемся через 24 часа после введения пирогенала, и оно составило 1501±512/мкл., то есть 20±6,8% от общего содержания кластеров.
Таблица 1. Содержание миелокариоцитов и эритроклазических кластеров (ЭК), в том числе и с экзоцитарным лизисом эритроцитов в костном мозге кроликов при лихорадке
|
Периоды наблюдения |
Содержание миелокариоцитов /мкл. |
Общее содержание ЭК |
Содержание ЭК с экзоцитарным лизисом эритроцитов |
||
|
в 1 мкл. костного мозга |
в % к числу миелокариоцитов |
в 1 мкл. костного мозга |
в % к числу миелокариоцитов |
||
|
до инъекции пирогенала |
86002±6333 |
4061±121 |
4,7±1,9 |
396±98 |
10±2,4 |
|
через 2 часа после инъекции пирогенала |
132251±2948* |
6848±2405* |
5,2±1,4 |
1456±544* |
21,3±8* |
|
через 4 часа после инъекции пирогенала |
162357±13458* |
7550±2952* |
4,5±2,1 |
2570±1122* |
34±14,8* |
|
через 24 часа после инъекции пирогенала |
179238±15759* |
7706±2295* |
4,3±1,3 |
5668±1030* |
73±13,4* |
|
через 48 часов после инъекции пирогенала |
60540±14075** |
7488±2670* |
12±4,4* |
1501±512** |
20±6,8** |
Примечание: *Р<0,001, относительно данных, полученных до инъекции пирогенала;
**Р<0,001, относительно данных, полученных через 24 часа после инъекции пирогенала
Таким образом, при пирогеналовой лихорадке наблюдается увеличение содержания миелокариоцитов в костном мозге подопытных животных. Это может быть связано со стимуляцией пирогеналом гемопоэза, в частности гранулоцитои моноцитопоэза [8]. На протяжении 48 часов после введения пирогенала происходит активация костномозгового эритроклазического кластерообразования, что свидетельствует об увеличении функциональной активности миелокариоцитов. При этом в кластерах интенсифицируется процесс экзоцитарного лизиса эритроцитов, что указывает на увеличение цитолитической активности миелокариоцитов при лихорадке. Нарастание общего количества эритроклазических кластеров, образованных гранулоцитарными миелокариоцитами всех стадий развития и макрофагами, а также количества кластеров с экзоцитарным лизисом эритроцитов при пирогеналовой лихорадке, можно объяснить праймированием (priming, англ.) нейтрофилов и макрофагов, в результате стимулирующего влияния пирогенала [1, 12]. Стимуляция липополисахаридом приводит к выработке и секреции миелокариоцитами цитокинов, в том числе и интерлейкинов, которые обладают решающим значением для запуска и реализации иммунного ответа. Таким образом лихорадка, вызванная введением пирогенала, приводит к активации гранулоцитои моноцитопоэза, что сопровождается и увеличением цитотоксичности миелокариоцитов. Это согласуется с представлениями об активации иммунной системы при лихорадочных состояниях [20, 21].
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ