Целью данного исследования было установить in vitro влияние препарата Интераль на показатели активации лимфоцитов периферической крови женщин с миомой матки малых размеров для оценки возможности применения данного препарата в лечении данной патологии. В исследование включены 18 женщин позднего репродуктивного возраста с интерстициальной миомой матки малых размеров. Материалом для исследования служила периферическая венозная кровь. Обогащенные популяции лимфоцитов выделяли стандартным методом скоростного центрифугирования в двойном градиенте плотности фиколлверографина (d=1,078 и d=1,14). Полученные клеточные фракции отмывали в Среде 199 с глутамином и антибиотиками и использовали в эксперименте в концентрации 2х106 кл/мл. Для оценки влияния препарата Интераль на уровень активации и апоптоза лимфоцитов 0,5 мл взвеси лимфоцитов в Среде 199 инкубировали с равным объемом препарата Интераль в концентрации 1х103 МЕ/мл в течение 1 часа при 370С. Далее клетки отмывали от препарата и инкубировали в Среде 199 при 370С в течение 20 часов. После окончания срока инкубации определяли уровень экспрессии активационных маркеров CD25, CD71, HLA-DR, CD11b CD95 на поверхности лимфоцитов, а также оценивали уровень клеток, вступивших в апоптоз, по тесту с Аннексином V и пропидиумом иодидом. В качестве контроля использовали показатели лимфоцитов, инкубировавшихся в тех же условиях только в Среде 199.
Препарат «Интераль» (человеческий рекомбинатный интерферон-альфа-2) разработан в Государственном НИИ особо чистых биопрепаратов Министерства здравоохранения и социального развития РФ (г.Санкт-Петербург), разрешен к применению на территории РФ, обладает антивирусной, противоопухолевой, иммуномодулирующей активностью.
Анализ полученных результатов показал, что инкубация периферических лимфоцитов женщин с миомой матки с препаратом Интераль приводила к значительному повышению уровня экспрессии активационного маркера CD25 на поверхности клеток. Достоверных отличий в экспрессии других маркеров активации на поверхности лимфоцитов, инкубировавшихся с Интералем и без него, нами не отмечалось. Изучение влияние Интераля на апоптоз лимфоцитов показало, что в целом количество апоптирующих клеток, оцениваемых по экспрессии на их поверхности Аннексина V, повышалось после инкубации с Интералем, однако это изменение не было статистически достоверным. Дифференцированный анализ содержания Аннексин V-позитивных клеток в зависимости от стадии апоптоза выявил резкое, практически 2-х кратное увеличение при воздействии препарата Интераль количества лимфоцитов, вступивших в ранние (обратимые) стадии апоптоза (Аннексин Vпозитивные/ пропидиум иодид-негативные лимфоциты), тогда как уровень лимфоцитов, находящихся на поздних стадиях апоптоза/некроза, в этих условиях снижался. Таким образом, стимуляция лимфоцитов периферической крови женщин с миомой матки малых размеров препаратом Интераль с одной стороны приводит к стимуляции клеток, о чем свидетельствует усиление экспрессии на их поверхности рецептора к интерлейкину-2, с другой стороны под влиянием препарата активированные клетки более интенсивно уходят в апоптоз, что можно расценивать как закономерное последствие усиленной клеточной активации. Учитывая гипотезу о вирусной этиологии миомы матки можно предположить, что у данного контингента больных Интераль будет стимулировать реакции адаптивного противовирусного иммунного ответа, что определяет перспективы его использования в консервативном лечении данной патологии.
Работа поддержана грантами Президента РФ по государственной поддержке научных школ НШ 2245.2003.4 и молодых кандидатов наук МК1270.2004.7.