Scientific journal
Advances in current natural sciences
ISSN 1681-7494
"Перечень" ВАК
ИФ РИНЦ = 0,775

Personal portfolio

Грибы рода Candida являются самыми распространенными возбудителями микотических заболеваний. Эта нозологическая форма является оппортунистической инфекцией, которая чаще возникает на фоне дисбаланса в иммунной системе организма, поэтому даже при наличии высокоактивных противогрибковых средств лечение кандидоза на фоне иммунодефицита не всегда бывает успешным. С возрастанием частоты встречаемости данного заболевания среди людей возрастает интерес к состоянию иммунной системы при кандидозах для выявления тех звеньев иммунной защиты, воздействие на которые могло бы способствовать успешному лечению. Важную роль в модуляции иммунного ответа играют цитокины, синтезируемые иммунными клетками. В настоящее время активно ведутся клинические и экспериментальные исследования, в которых исследуется цитокиновый профиль при кандидозах. Например, известно, что выработка цитокинов Тh1 типа (IL-12 и IFN-φ) коррелирует с эффективным излечением от кандидоза, а цитокины Тh2 типа (IL-4, IL-10) способствуют хронизации процесса и аллергизации организма. Отмечено, что у больных с рекуррентным вагинальным кандидозом наблюдался пониженный уровень продукции IFNgamma мононуклеарными клетками, стимулированными Candida albicans, а реакция на антигены Candida соответствовала 1 типу гиперчувствительности, что, как известно, отражает преобладание Th2 профиля. В подобных исследованиях тестируются на способность к синтезу цитокинов иммунные клетки людей, больных кандидозом, либо иммунная система животных при экспериментальной инфекции, вызванной грибами. Но уровень продукции цитокинов зависит не только от состояния иммунной системы, но и от самого стимулирующего фактора-индуктора, от его качественного и количественного состава. Поэтому целью нашего исследования является оценка влияния грибов рода Candida на выработку некоторых цитокинов (IL1α,,TNF-α, IL-4, IFN-γ) иммунными клетками периферической крови донора.

Материалыиметоды. В исследовании использовались 42 клинических штамма грибов рода Candida, полученных при микробиологическом обследовании пациентов с подозрением на кандидозный процесс. Данные штаммы культивировались 48 часов на среде Сабуро, дважды отмывались буферным раствором при центрифугировании (3000 об/мин в течение 15 мин). Для приготовления антигена грибные клетки прогревались при 80˚ С в течение 1 часа на водяной бане, для стимуляции цитокинопродукции использовалась суспензия, содержащая 10 в 7 степени кл/мл. При постановке использовалась цельная периферическая гепаринизированная кровь донора, разведенная средой RPMI 1640 с глутамином в соотношении 1:5. Кровь и грибной антиген в соотношении 1:1 помещались в иммунологический планшет. В качестве контроля (оценка спонтанной индукции) использовалась кровь с добавлением культуральной среды без грибного антигена. Планшеты инкубировались 72 часа (для IFN-gamma) и 24 часа (для остальных цитокинов) в условиях эксикатора (37˚С, 0,5 % СО2). После инкубации сняты супернатанты, разделены на малые порции и заморожены при -70˚ С. Определение количества цитокинов в супернатантах производилось методом ИФА с использованием специальных тестсистем (производство ЗАО «Вектор-Бест» г. Новосибирск, Россия, ООО «Цитокин» г. Санкт-Петербург, Россия).

Так как клетки крови при манипуляциях способны к спонтанной выработке цитокинов, при анализе результатов важно оценить не столько абсолютные значения содержания цитокинов в супернатантах, сколько отношение уровня индуцированной цитокинопродукции к уровню спонтанной.

Результаты. Средние значения производства выбранных цитокинов следующие содержание:

IL-1α в супернатантах

  • без индукции  (спонтанная продукция) - 2,22±0,1пг/мл,
  • под воздействием индукции грибами (индуцированная продукция) - 29,24 ± 7,56 пг/мл.,
  • соотношение  индуцированная/спонтанная -10,93±5,14

TNF-α :

  • спонтанная продукция 6,89±0,48 пг/мл
  • индуцированная - 180,43 ± 84,12 пг/мл
  • соотношение индуцированная / спонтанная 38,18±18,06

IL-4 :

  • спонтанная продукция - 2,59 ± 0,32 пг/мл
  • индуцированная - 4,49 ± 2,13 пг/мл
  • соотношение индуцированная/спонтанная 1,77±0,95

IFN-γ:

  • спонтанная продукция -1023,0 ± 0 пг/мл
  • индуцированная - 994,32 ± 25,86 пг/мл
  • соотношение индуцированная / спонтанная 0,97±0,07

Таким образом, при совместном культивировании клеток крови донора с антигеном, полученным из клинических штаммов грибов рода Candida, in vitro через 24 часа в супернатантах фиксируется активная наработка провоспалительных цитокинов (IL-1α, TNF-α) и низкий уровень противовоспалительного-IL4. Примечателен тот факт, что IFN-γ синтезируется слабо под воздействием грибного антигена даже через 72 часа.