В практической деятельности морфолога наиболее сложными остаются вопросы дифференциальной диагностики между дисплазиями различной степени и, что особенно актуально, между тяжелой дисплазией и высокодифференцированной аденокарциномой. Исследованию содержания ДНК в ядрах клеток слизистой оболочки желудка посвящено небольшое число работ [ 4, 7-9, 11, 13]. Большинство из них отражает изменения содержания ДНК в клетках злокачественных опухолей желудка и лишь единичные - при фоновых и предраковых поражениях. Полученные данные разноречивы. По данным Казанцевой И.А., при гастрите содержание ДНК в ядрах эпителиальных клеток слизистой оболочки желудка существенно отличается от нормы: преобладают тетраплоидные клетки, значительно содержание параоктаплоидных клеток. По данным других авторов [7] при дисплазии III степени преобладали диплоидные клетки, а при неинвазивном раке преобладали тетра и октаплоидные, среднее содержание ДНК для дисплазии III степени триплоидное, неинвазивный рак характеризовался паратетраплоидным набором. Нами не обнаружены работы, в которых проводили морфометрическую оценку площади ядра клетки слизистой оболочки желудка в процессе озлокачествления и изучения коррелятивных взаимоотношений плоидность - площадь ядра при решении дифференциальнодиагностических вопросов.
Из сказанного выше можно предположить,что определение изменения содержания ДНК и соответственно плоидности ядра может быть использовано как один из маркеров пролиферативной активности эпителия желудка и как возможный критерий оценки изменений состояния слизистой оболочки желудка от воспалительных изменений до неопластического перерождения, а также при раке желудка различного гистологического строения. Кроме того, широкое внедрение в практическую деятельность врачей компьютерных технологий и программ при оценке морфометрических параметров клеток позволяет более объективно судить о характере изменений.
Работа выполнена на биопсийном и операционном материале (172 больной в возрасте от 14 - 80 лет, в том числе 92 мужчин и 80 женщин).
Исследовано 26 случаев атрофического гастрита; 25 с признаками неполной кишечной метаплазии без дисплазии; с кишечной метаплазией в сочетании со слабой и умеренной дисплазией -5; с дисплазией эпителия желез I - II степени 6 и дисплазией III степени 4.
Изучено 6 высокодифференцированных аденокарцином, 21 умеренно дифференцированная,13 низкодифференцированных; недифференцированного рака было 16; перстневидноклеточного рака - 10, рака сложного гистологического строения 30. Контролем служили 10 микропрепаратов из патологически неизмененной слизистой оболочки желудка, полученных при гастробиопсии.
Материал фиксировали в 10% растворе нейтрального формалина, кусочки ткани заливали в парафин. Срезы толщиной 5 мкм окрашивали по методу Фельгена (продолжительность гидролиза 90 мин при комнатной температуре), параллельно окрашивали гематоксилином и эозином, проводили реакцию Гримелиуса, ШИК - реакцию, окрашивали альциановым синим. Для суждения об общем количестве генетического материала в ткани или опухоли использовали обобщенный показатель кинетики количества ДНК - «индекс накопления» ДНК (ИНДНК) в единицах плоидности [1], представляющую собой взвешенную среднюю арифметическую и предложенный отечественными авторами «индекс клональной пролиферации» - ИКП (отношение средних показателей ИНДНК для изучаемых стадий канцерогенеза к показателям, характеризующим исходную нормальную ткань [3]. В каждом препарате определяли содержание ДНК в ядрах 25 30 клеток ростковой зоны в гистологическом срезе, интерфазных клетках рака, а также в ядрах 25 - 30 малых лимфоцитов. Среднее содержание ДНК в ядре лимфоцита принимали за диплоидное значение (2с). Затем рассчитывали содержание ДНК в эпителиальных и опухолевых клетках в единицах плоидности. В оценке данных использовали компьютерную технологию для гистологической и цитологической техники с применением анализатора изображений, состоящего из микроскопа LEICA Laborlux, черно - белой видеокамеры JVC, фреймграббера и компьютера Pentium II с программным обеспечением "ВидеоТесТ - Морфо". Данные микроспектрофотометрии обрабатывали статистически с использованием критерия достоверности Стьюдента, Манна - Уитни, корреляцию определяли по методу Пирсона.
Таблица 1. Дифференциально-диагностические морфометрические параметры при фоновых и предраковых изменениях ядер эпителия слизистой желудка
|
Изменения эпителия |
Площадь ядра мкм² |
ИНДНК в ед плоидности (с) |
ИКП |
|
Норма (n=10) |
50,6±1,0 |
2,3±0,1 |
0,3 |
|
Гастрит атрофический (n=26) |
75,57±6,02 |
2,7±0,1 |
0,7 |
|
Кишечная метаплазия (n=25) |
97,2±5,06 |
3,2±0,2 |
1,2 |
|
Дисплазия легкая, умеренная (n=6) |
147,15±10,54 |
5,5±0,5 |
3,5 |
|
Дисплазия тяжелая (n=4) |
213,7±3,42 |
10,2±0,2 |
8,2 |
Из приведенных в таблице данных видно, что содержание ДНК в единицах плоидности в патологически неизмененной ткани не превышало 2,3±0,1с, а площадь ядра составила 50,6±1,0 мкм². При атрофическом гаcтрите эти данные изменились в сторону увеличения плоидности и площади ядра и составили 2,7±0,1с и 75,57±6,02 мкм² соответственно. При анализе кишечной метаплазии без дисплазии выявлено, что средняя арифметическая плоидности ядер возрастала и составила 3,2±0,2с, площадь ядер возросла до 97,2±5,06мкм².
Дисплазия эпителия желез I II степени характеризовалась дальнейшим увеличением плоидности и площади ядер до 5,5±0,5с и 147,15±10,54 мкм² соответственно. Последующее нарастание диспластических изменений эпителия до III степени привело к повышению плоидности ядер до 10,2±0,2с, а площадь ядер составила 213,7±3,42 мкм².
Приведенные данные свидетельствуют о повышении плоидности и соответственно пролиферативной активности в цепочке изменений от гистологической нормы (2,3±0,1с) до дисплазии тяжелой степени (10,2±0,2с). Наряду с плоидностью ядер клеток слизистой оболочки ценным морфометрическим параметром оказалась площадь ядер клеток в процессе малигнизации (различия статистически достоверны р<0,05).
Полученные данные свидетельствуют о дальнейшем изменении плоидности и площади ядер в неопластически измененном эпителии слизистой оболочки желудка. Так, при аденокарциноме высокой степени дифференцировки средняя арифметическая плоидности ядер раковых клеток составила 16,2±2,7с, а площадь ядер была 375,02±17,0 мкм². Дальнейшее уменьшение дифференцировки аденокарциномы сопровождалось достоверным снижением содержания ДНК в единицах плоидности и площади ядер до 9,7±1,4с и 296,6±16,0 мкм² при умеренной дифференцировке и 7,6±1,1с и 216,2±17,0 мкм² в случае аденокарцином низкой степени дифференцировки (t=2,3; р<0,05). Недифференцированный рак характеризовался снижением плоидности и площади ядер раковых клеток (5,3±0,9 и 156,3±13,5 мкм² соответственно). В опухолях сложного гистологического строения плоидность составила 6,3±2,3с, площадь раковых клеток -187,4±63,8 мкм². Такое стандартное отклонение свидетельствует о выраженной разнонаправленности дифференцировки клеток такого типа рака.
Наименьшим показателем плоидности и площади ядер обладает перстневидноклеточный рак 3,4±0,6с и 119,7±15,0 мкм² соответственно. Полученные данные изменения плоидности соответствуют литературным данным [6] и их достоверность не вызывает сомнений.
Таблица 2. Дифференциально-диагностические морфометрические параметры ядер опухолевых клеток при различных гистологических вариантах рака желудка
|
Тип опухоли |
Площадь ядра, мкм² |
ИНДНК в ед. плоидности (с) |
ИКП |
|
Аденокарцинома Высоко(n=6) Умеренно (n=21) Низкодифференцированная (n=13) |
375,02±17,0 296,6±16,0 216,2±17,0 |
16,2±2,7 9,7±1,4 7,6±1,1 |
14,2 7,7 5,6 |
|
Перстневидноклеточный рак (n=10) |
119,7±15,0 |
3,4±0,6 |
1,4 |
|
Сложного строения (n=30) |
187,4±63,8 |
6,3±2,3 |
4,3 |
|
Недифференцированный рак (n=16) |
156,3±13,5 |
5,3±0,9 |
3,3 |
При оценке корреляции между плоидностью и площадью ядра как раковых клеток, так и эпителиальных клеток при гастритах, кишечной метаплазии и дисплазии различной степени выявлена прямая линейная положительная корреляция (r= 0,96).
Обнаружены достоверные отличия плоидности (t=9,4; р<0,05) и площади ядер (t=6,0; р<0,05) между умеренной и тяжелой дисплазией эпителия, а также между тяжелой дисплазией и высокодифференцированной аденокарциномой.
Данные о содержании ДНК в ядрах эпителиальных клеток рака желудка, фоновых и предраковых процессах, полученные нами с помощью компьютерной микротелефотометрии, совпадают с результатами проточной цитофотометрии [10,11, 12] и подтверждают высокую точность используемого способа измерения.
ВЫВОДЫ
Результаты кариометрического анализа наглядно демонстрируют кинетику увеличения размерных признаков ядра эпителиальных клеток по мере нарастания степени выраженности неопластической трансформации. Отмеченная коррелятивная зависимость между параметрами площади и плоидности ядер также позволяет рекомендовать оба этих показателя для использования в диагностических целях при морфометрическом анализе воспалительных изменений, кишечной метаплазии, дисплазии и рака желудка различного гистологического строения.
Выявленные достоверные отличия плоидности и площади ядер между умеренной и тяжелой дисплазией эпителия, а также между тяжелой дисплазией и высокодифференцированной аденокарциномой позволяют более широко использовать данные компьютерной гистоспектрофотометрии в вопросах дифференциальной диагностики между дисплазиями и раком желудка.
Полученные данные подтверждают общую закономерность экспоненциального накопления ДНК в ядрах озлокачествляющихся клеток.
Высокая плоидность ядер в аденокарциномах свидетельствует о том, что это, по - видимому, наиболее быстро растущие, активно пролиферирующие типы рака желудка, что совпадает с мнением авторов, которые полагают, что аденокарциномы обладают высокой пролиферативной активностью, что обусловливает высокую скорость роста и относительно короткое клиническое течение [5]. Недифференцированный рак, напротив, обладает более слабой пролиферативной активностью и небольшой скоростью роста опухоли, но вместе с тем низкая гистотипическая дифференцировка такого рака определяет высокую инвазивность их клеток, и относительно длительное клиническое течение, что обусловливает низкий процент 5-летней выживаемости после операции.
Литература:
- Автандилов Г.Г. Медицинская морфометрия. - М.: Медицина, 1990. - 384 с.
- Автандилов Г.Г. Компьютерная микротелефотометрия в диагностической гистоцитопатологии. - М.: РМАПО, 1998. - 256 с.
- Автандилов Г.Г. //Вопр.онкол. - 2000. -Т.46. №4. - С. 423 - 426.
- Автандилов Г.Г., Василенко И.В. // Бюлл.экспер.биол., - 1977. Т. 35. №7. - С.54 -57.
- Дикштейн Е.А., Василенко И.В., Шевченко Н.И., Мережко В.А. // Арх. патол. - 1979 №7. С. 25 - 32.
- Жданов А.С., Несветов А.М. // Бюлл.эксперим. биол - 1981. - № 4. С. 467 - 469.
- Золотаревский В.Б., Склянская О.Л. // Арх. патол - 1985. №12. С.58 - 66.
- Казанцева И.А. // Вопр.онкол. - 1973. -Т. XIX. №9. - С.51 - 54.
- Петрова А.С., Зубрихина Г.Н., Чистякова О.В., Лукина Т.А. // Арх. патол. - 1980. №4. -С. 47 - 51.
- Ташкэ К. Введение в количественную цито - гистологическую морфологию. - Издательство Академии Соц. Республики Румынии,1980. - 191 с.
- Setala L., Lipponen P., Kosma V., Marin S. et al. // J. Pathol. -1997. -181. -N 1. -C. 46-50.
- Tribukait B.// Recent Results in Cancer Research. 1993. -Vol. 133. P. 25-31
- Xu Lei, Zhang Sumin, Zhou Zhongde.// Zhongguo yike daxue xuebao = J. China Med. Univ. -1998. -27. -N 3. -C.241-242, 246