Scientific journal
Advances in current natural sciences
ISSN 1681-7494
"Перечень" ВАК
ИФ РИНЦ = 0,791

Внутривидовое разнообразие Y. pestis проявляется в существовании целого ряда популяций, обусловленных географической разобщенностью очагов чумы с выраженными экологическими различиями. На основании 16 различных фенотипических признаков совещание специалистов противочумных учреждений Советского Союза, состоявшееся в Саратове в 1985 г., рекомендовало классифицировать все "российские изоляты" возбудителя чумы на следующие "подвиды": pestis (основной), altaica, caucasica, hissarica и ulegeica. Штаммы Y. pestis, относящиеся к разным подвидам, различаются по: плазмидным профилям; геномно-дактилоскопическим картинам, полученным при IS-типировании; продукции пестицина и чувствительности к пестицину; фибринолитической/плазмокоагулазной активностям; зависимости от факторов роста и избирательной вирулентности.

В настоящее время бактериофаги являются не только излюбленным объектом в базовых экспериментах молекулярной биологии, но и широко используются при изучении поверхностных структур клеток, несущих в своем составе сайты для их посадки. По типу литического цикла бактериофаги традиционно подразделяются на две группы: облигатно литические или вирулентные и умеренные, которые способны либо вызывать литическую инфекцию, либо включаться в геном хозяина в виде профага (Hertwig et al.,1999). Именно вирулентные фаги используются для типирования штаммов в эпидемиологических целях.

Целью настоящего исследования было установление внутривидовых и температуро-зависимых различий в чувствительности штаммов Y. pestis к чумным диагностическим (Покровского, Л-413с) и RЛПС-специфичным (С21, FР1).

Чувствительность 53 природных изолятов и 19 лабораторных штаммов (музеи живых культур РосНИПЧИ "Микроб" (Саратов) и Иркутского НИПЧИ Сибири и дальнего Востока), представляющих различные подвиды Y. pestis и выращенных при температурах 25 oC и 37 oC, к чумным диагностическим и RЛПС-специфичным бактериофагам изучали двухслойным методом. Электрофоретический анализ скорости миграции липополисахаридов в 15 % полиакриламидном геле с SDS проводили по методу Laemmli (1970).

Выявлена определенная взаимосвязь между чувствительностью к фагу FР1, рецептором для которого является гептоза (Hep) внутреннего кора ЛПС, и подвидовой принадлежностью исследованных штаммов Y. pestis. Наибольшей чувствительностью обладали изоляты subsp. pestis и штаммы subsp. altaica. Представители остальных подвидов обладали более выраженной фагоустойчивостью. Электронномикроскопическое изучение адсорбции фага FP1 на бактериальных клетках показало зависимость данного процесса от штаммовых особенностей и температуры их культивирования. Электрофоретический анализ препаратов ЛПС из штаммов, выращенных при температурах 25 oC, 28 oC и 37 oC показал, что препараты липополисахаридов большинства культур, выращенных при более высоких температурах, обладали большей подвижностью, по сравнению с препаратами из культур, выращенных при наиболее низкой температуре. При этом не было выявлено достоверных различий в подвижности препаратов ЛПС, изолированных из штаммов Y. pestis, представляющих различные подвиды. Таким образом, именно чувствительность к фагу FP1, а не электрофоретическая подвижность ЛПС коррелирует с другими фенотипическими признаками, используемыми для внутривидовой классификации штаммов Y. pestis.

Полученные данные, с учетом результатов типирования имеющегося набора авирулентных штаммов Y. pestis вторым R-ЛПС специфичным фагом C21 (адсорбируется только при отсутствии концевой галактозы (GAL) на расположенной ниже глюкозе (GLC)) и двумя чумными диагностическими фагами с неустановленными рецепторами, послужили основой для выбора штаммов - продуцентов ЛПС, отличающихся по своей структуре для ее последующего изучения.

Работа выполнена в рамках партнерского проекта International Science & Technology Center #1197p, поддержанного программой Cooperative Threat Reduction Департамента Обороны США.