Атопический дерматит (АтД) является одной из наиболее распространенных форм аллергического поражения кожи. Показатель распространенности АтД растет во всем мире. Распространенность АтД в детской популяции составляет до 15-30 %, во взрослой – до 2-10 % [1]. Иммунопатогенез АтД – многоэтапный и сложный процесс, полностью не изученный до настоящего времени и требующий дальнейшего более подробного исследования.
АтД – хроническое воспалительное заболевание кожи, развивающееся по IgE-зависимому механизму, патогенез которого связан с дисбалансом иммунорегуляторных субпопуляций в сторону поляризации Th2 пути и соответствующим изменением их цитокинового профиля.
Исследование цитокинового профиля при АтД позволяет оценить характер воспаления, а также назначить соответствующую противовоспалительную терапию.
Цель работы: Определение профиля цитокинов в бесклеточной фракции экссудата «кожного окна» при атопическом дерматите в разные стадии болезни и в разных участках кожи.
Материал и методы: Концентрация цитокинов определялась в бесклеточных кожных экссудатах, получаемых согласно патенту № 1534395 на изобретение «Способ диагностики аллергического диатеза» В.В. Климова, Т.В. Кошовкиной, В.К. Раткина и А.А. Денисова (1993) и медицинской технологии «Способ оценки минимальной воспалительной активности кожи при атопическом дерматите в стадии ремиссии» ФС №2010/217 (2010) [2,3]. Обследовано 59 больных АтД и 10 здоровых добровольцев. Диагноз АтД устанавливался на основании данных анамнеза, клинической картины, кожного аллергологического тестирования, содержания IgE. Степень тяжести заболевания устанавливалась с учетом индекса SCORAD.
Переднюю сторону предплечья дезинфицировали спиртом. Затем в средней трети ладонной поверхности предплечья с помощью стерильного скальпеля удаляли верхний слой эпидермиса, не затрагивая более глубокие слои кожи. Удалив роговой слой на участке кожи площадью 0,5x0,5 см образовывалась поверхность с характерным блеском. Слой шиповатых клеток, базальных клеток и базальная мембрана эпидермиса оставались интактными. На скарифицированный участок помещали камеру объемом 1,0 мл, предварительно заполненную с помощью шприца стерильной средой 199. Камеру фиксировали на коже с помощью лейкопластыря. Круговая обвязка предплечья лейкопластырем обеспечивала наиболее надежную фиксацию камеры.
Через 6 часов камера снималась, ее содержимое пипеткой собиралось и переносилось в пробирку. После центрифугирования экссудата получался супернатант, который в дальнейшем использовался для определения цитокинов.
Для определения продукции IL-4, IL-10, IL-17 и IFN-г были использованы наборы реагентов «ИЛ-4-ИФА-БЕСТ», «ИЛ-10-ИФА-БЕСТ», «ИЛ-17-ИФА-БЕСТ» и »гамма-ИНТЕРФЕРОН-ИФА-БЕСТ» (ЗАО «Вектор-Бест», г. Новосибирск). Постановку ИФА проводили в соответствии с методическими рекомендациями производителя.
Анализ результатов ИФА проводили на микропланшетном ридере Multiscan EX («Labsystems», Финляндия). Расчет концентрации цитокинов осуществлялся по калибровочной кривой с помощью компьютерной программы. Количество выражали в пикограммах на миллилитр (пг/мл). Статистическая обработка результатов исследования проводилась с помощью пакета статистических программ «SPSS». Для представления количественных данных, не подчиняющихся нормальному закону распределения, использовались описательные статистики: Ме (медиана), Q1 (1-й квартиль (25 %)) и Q3 (3-й квартиль (75 %)). Для всех имеющихся выборок данных применялись непараметрические критерии Краскал-Уолиса и Манна – Уитни.
Результаты. Как видно из таблицы № 1, в периоде ремиссии сохраняется в основном та же направленность в отклонениях в содержании цитокинов, что была отмечена в периоде обострения. Наблюдаются высокие уровни IL-4 и IL-10, при этом снижение IFN-γ в стадию ремиссии даже более значительное и достоверно отличается по отношению к обобщённой группе больных АтД в остром периоде. Эти данные согласуются с литературным источником [4].
Таблица 1
Содержание IL-4, IFN-g, IL-10 и IL-17 в экссудате «кожного окна» у здоровых лиц и пациентов с АтД в динамике процесса, Ме (Q1-Q3)
|
Группа |
IL-4 (пг/мл) |
IFN-γ (пг/мл) |
IL-10 (пг/мл) |
IL-17 (пг/мл) |
|
Контроль |
0,45 (0,4–0,7) n=10 |
46 (35,5–51,75) n=10 |
7 (3,5–13,5) n=10 |
23 (7,75–34,55) n=8 |
|
Больные АтД, период обострения |
0,85 (0,4-1,2) n=31 р1 |
36 (20-65,7) n=36 |
27 (10-60,5) n=24 р1 |
15,5 (7-29) n=32 |
|
Больные АтД, период ремиссии |
0,8 (0,4-0,97) n=13 р1 |
15,5 (10,3–41,5) n=13 p1, р2 |
27 (20–35) n=10 р1 |
24 (13,5–36,7) n=17 |
Примечания: Ме – медиана, Q1 – первый квартиль, Q3 – третий квартиль, р1 – достоверность различий в сравнении с контрольной группой (р<0,05), р2 – достоверность различий в сравнении с периодом обострения АтД (р<0,05).
Таблица 2
Содержание IL-4, IFN-g, IL-10 и IL-17 в экссудате «кожного окна» у здоровых лиц и пациентов с АтД в зависимости от места установки камеры, Ме (Q1-Q3)
|
Группа |
IL-4 (пг/мл) |
IFN-γ (пг/мл) |
IL-10 (пг/мл) |
IL-17 (пг/мл) |
|
Контроль |
0,45 (0,4–0,7) n=10 |
46 (35,5–51,75) n=10 |
7 (3,5–13,5) n=10 |
23 (7,75-34,55) n=8 |
|
Здоровый участок кожи в периоде ремиссии |
0,5 (0,14-0,97) n=7 |
27,6 (22-44) n=6 |
11,6 (10-22) n=5 |
22 (11,5-36,7) n=7 |
|
Участок лихенификации в периоде ремиссии |
0,95 (0,4-1,2) n=6 р1 |
31 (10,3-65,7) n=7 р1 |
37,5 (30-65,5) n=5 р1, р2 |
15 (7-29) n=10 |
Примечания: Ме – медиана, Q1 – первый квартиль, Q3 – третий квартиль, р1 – достоверность различий в сравнении с контрольной группой (р<0,05), р2 – достоверность различий в сравнении со здоровым участком кожи в периоде ремиссии АтД (р<0,05)
В результате было установлено, что место установки камеры влияет только на IL-10, содержание которого существенно возрастает в очагах лихенификации по сравнению со здоровыми участками кожи. Это согласуется с особенной ролью IL-10 в аллергических процессах. IL-10 вырабатывается многими видами клеток (Тх2, Tr1, дендритные клетки и др.). По-видимому, многие их них вовлечены в процессы ремоделлирования кожи.
Заключение. Таким образом, в периоде ремиссии АтД отмечается повышение IL-4 и снижение IFN-g – изменения, характерные также для острого периода болезни и отражающие атопический характер патологии с поляризацией в сторону Тх2. В очагах лихенификации по сравнению со здоровыми участками кожи отмечается повышение содержания IL-10, что может свидетельствовать о важной роли этого цитокина в процессах ремоделирования кожи при АтД.