Весьма перспективными являются изучение, разработка и внедрение новых физико-химических методов, в частности кристаллографического метода исследования. Предлагаемый метод технически прост и доступен для любых лабораторий. Он дает возможность кристаллографического исследования и других биологических субстратов [1-4].
В процессе проводимого лечения кристаллограммы при различных патологиях характеризуются различным числом центров кристаллизации, увеличением их размеров, разной формой кристаллов [5-11].
Анализ литературных данных показал, что первоначально в качестве биологической жидкости использовали плазму/сыворотку крови и слезную жидкость то в последние годы изучают формирование структур твердой фазы лимфы, мочи, ликвора, желчи, ушного и назального содержимого, раневого отделяемого и др [1-11].
В настоящее время исследование структурообразующих свойств биожидкостей проводят в разных направлениях, прежде всего, разрабатываются модели для объяснения молекулярных событий при дегидратации биологических жидкостей [7, 10, 11].
По мнению многих авторов, изменение морфотипов тезиограмм плазмы крови может быть обусловлено окислительной модификацией белков [1-11].
Основное направление связано с изучением характера и направленности изменения структурообразующих свойств биологических жидкостей при патологических состояниях, и диапазон их применения служит для диагностики, прогноза и оценки эффективности лечения [1-11].
Таким образом, возможности кристаллографического метода исследования позволяет выявить начальный этап сенсибилизации или аллергический фон, на котором протекает инфекционное заболевание.
Нами для дифференциальной диагностики было применено тезиграфическое исследование, которое заключается в способности кристаллообразующего вещества изменять нормальное образование кристаллов.
Цель исследования: оценка особенностей кристаллизации ротовой жидкости у пациентов с лямблиозной инвазией.
Материалы и методы исследования
Для оценки особенностей кристаллизации ротовой жидкости при лямблиозе были исследованы кристаллограммы 80 пациентов с лямблиозной инвазией,.группой сравнения послужили 30 практически здоровых лиц в возрасте от 18 до 45 лет без заболеваний полости рта.
Для изучения особенностей твердой фазы биологической жидкости при паразитарной инвазии использовалась полученная при свободном вытекании слюна. Каплю ротовой жидкости объемом 0,1 мл автоматической микропипеткой наносили на поверхность обезжиренного предметного стекла, накрывали чашкой Петри и высушивали при температуре 23-25 ºС, относительной влажности 60-70 % в строго горизонтальном положении. Продолжительность периода высыхания составляла 24 ч. Исследования структуры слюны выполняли с помощью оптического микроскопа Микмед-5 при 40-ка и 100-кратном увеличении. С помощью цифровой окулярной видеокамерыUCMOS с разрешением матрицы 14 Мпикс изображение передавалось на экран монитора. Участки кристаллограмм записывались в виде графического файла с разрешением 96 dpi в формате JPEG. Анализ кристаллограмм проводился в графическом редакторе AdobePhotoshop. При описании кристаллограмм учитывались рекомендации А.Б. Денисова [7].
Результаты исследования и их обсуждение
Основным видом кристаллов слюны являются так называемые дендриты, или скелетные кристаллы, представленные основными ветвями скелета и отходящими от них ветвями второго и последующих порядков. В кристаллограмме слюны выделяют краевую, переходную и центральную зоны (рис. 1).При описании кристаллограмм учитывали: наличие переходной зоны, длину кристаллов, наличие на них отростков 2-го и последующих порядков, форму окончания отростков, ширину основной оси кристаллов, наличие кристаллов нетипичной формы.
Рис. 1. Кристаллограмма слюны (4 × 10): 1 – краевая зона кристаллограммы; 2 – переходная зона; 3 – центральная часть кристаллограммы
Кристаллограммы ротовой жидкости в группе сравнения характеризовались наличием четко выраженных краевой, промежуточной и центральной зон. Центральная кристаллическая зона занимала большую часть капли и была заполнена дендритами. В большинстве случаев дендриты занимали всю центральную зону капли, в 25 % случаев в центральной части наблюдалось разреженное расположение дендритов (рис. 2).
Рис. 2. Плотное и разреженное расположение дендритов в центральной части капли слюны у лиц группы сравнения (4 × 10)
Длина дендритов центральной части кристаллограммы варьировала от 0,4 до 1,3 мм, ширина главной оси кристалла – от 0,01 до 0,06 мм. У 95 % образцов наблюдалась четко выраженная переходная зона (табл. 1). У всех образцов дендриты имели типичное строение: хорошо выраженные основные ветви и ветви второго порядка, у 80 % образцов наблюдались ветви третьего порядка. Длина ветвей второго порядка составляла от 0,1 до 0,8 мм. В большинстве случаев окончания боковых ветвей кристаллов имели округлую форму.
Характерной особенностью кристаллограмм слюны у лиц с лямблиозом являлась слабая выраженность переходной зоны. В 80 % образцов переходная зона не дифференцировалась или была очень тонкой.
В кристаллограммах слюны лиц с лямблиозной инвазией помимо обычных дендритов наблюдались другие формы кристаллов: с утолщенной главной и боковой осями, слабо разветвленные нитевидные кристаллы, кристаллы с раздвоенными кончиками боковых ветвей, крестообразные, папоротникообразные, коралловидные.
Кристаллы с сильно утолщенной главной осью и короткими отростками (рис. 3) в кристаллограммах слюны исследуемой группы встречались с частотой 15 %.
С такой же частотой в кристаллограммах слюны лиц с лямблиозной инвазией наблюдались кристаллы с утолщенными ветвями второго порядка (папоротникообразные кристаллы). Кристаллы данного вида занимали всю центральную зону капли, в некоторых образцах наряду с утолщенными кристаллами наблюдались дендриты типичного строения.
а б
Рис. 3. Кристаллограммы слюны лиц с лямблиозной инвазией (4 × 10): а – кристаллы с утолщенной главной осью; б – папоротникообразные кристаллы
В 20 % образцов кристаллограмм слюны в исследуемой группе лиц наблюдались крестообразные кристаллы (рис. 4). В большинстве образцов крестообразные кристаллы занимали всю центральную зону кристаллограммы.
Рис. 4. Крестообразные кристаллы ротовой жидкости у лиц с лямблиозной инвазией (10 × 10)
Нитевидные извилистые (коралловидные) кристаллы (рис. 5) в кристаллограммах слюны больных лямблиозом встречались сравнительно редко, в 8 % образцов. Коралловидные кристаллы всегда наблюдались в сочетании с обычными дендритами или крестообразными кристал лами.
а б
Рис. 5. Коралловидные и нитевидные кристаллы ротовой жидкости у лиц с лямблиозной инвазией (10 × 10): а – коралловидные кристаллы вместе с обычными дендритами; б – нитевидные кристаллы
Форма окончаний боковых ветвей у кристаллов ротовой жидкости в исследуемой группе отличалась от таковой в группе сравнения. Так, в 63 % образцов окончания боковых ветвей кристаллов имели копьевидную форму, в 10 % образцов окончания боковых ветвей кристаллов имели дополнительные отростки (рис. 6).
а б
Рис. 6. Форма окончаний боковых ветвей кристаллов слюны у лиц с лямблиозной инвазией (10 ×10): а – копьевидная форма окончаний; б – кристаллы с дополнительными отростками на окончаниях боковых ветвей
Длина кристаллов слюны в исследуемой группе варьировала в широких пределах – от 0,3 до 2,4 мм. В большинстве кристаллограмм наблюдались кристаллы, длина которых превышала 0,7 мм. Толщина кристаллов варьировала в пределах 0,01 – 0,09 мм, в большинстве случаев толщина главной оси кристаллов не превышала 0,02 – 0,04 мм. Длина боковых осей второго порядка составляла от 0,02 до 0,09 мм. В 70 % образцов у кристаллов на боковых осях второго порядка наблюдались только микроотростки, без развитых осей третьего порядка. Сравнительная характеристика кристаллов слюны в группе практически здоровых лиц и в группе с лямблиозом представлена в таблице.
Характеристика кристаллов центральной части капли слюны у лиц группы сравнения и лиц с лямблиозом
|
Показатели |
Группа сравнения(n = 30) |
Больные с лямблиозом (n = 80) |
|
Наличие нетипичных дендритов в центральной зоне кристалограммы |
в 5 % образцов |
в 58 % образцов |
|
Длина кристаллов центральной зоне, мм |
1,10 ± 0,20 |
0,96 ± 0,15 |
|
Длина отростков второго порядка, мм |
0,35 ± 0,07 |
0,33 ± 0,05 |
|
Наличие отростков третьего порядка на отростках второго порядка |
80 % кристаллов с отростками третьего порядка |
30 % кристаллов с отростками третьего порядка |
|
Ширина главной оси кристалла, мм |
0,054 ± 0,01 |
0,042 ± 0,01 |
|
Выраженность переходной зоны |
выражена у 95 % образцов |
выражена у 20 % образцов |
|
Форма кончиков отростков |
65 % – округлая 30 % –тупая 5 % – копьевидная |
63 % – копьевидная 10 % – раздвоенная |
Установлено, что средние значения длины кристаллов и отростков второго порядка, а также ширины главной оси кристаллов ввысушенных каплях ротовой жидкости у лиц группы сравнения и лиц с лямблиозом достоверно не отличаются. Вместе с тем, сравнительный анализ морфометрических признаков кристаллов и кристаллограмм позволил выявить характерные особенности кристаллизации ротовой жидкости у лиц с лямблиозной инвазией. Так, в большинстве кристаллограмм ротовой жидкости у лиц с лямблиозом отсутствовала выраженная переходная зона. Более чем в половине образцов кристаллических налетов ротовой жидкости у лиц с лямблиозом наблюдались нетипичные формы кристаллов: с утолщенной главной и боковой осями, крестообразные, папоротникообразные, коралловидные. В группе сравнения кристаллы нетипичного строения наблюдались только в 5 % образцов. Кристаллы ротовой жидкости у лиц с лямблиозом отличались меньшей разветвленностью из-за отсутствия боковых осей третьего порядка. Для кристаллов ротовой жидкости у лиц с лямблиозом были характерны копьевидные окончания боковых ветвей, тогда как для кристаллов лиц группы сравнения – округлые.
Сравнительный анализ морфометрических признаков кристаллических налетов слюны позволил выявить особенности кристаллизации ротовой жидкости у лиц с лямблиозной инвазией.
Выводы
1. Оценка изменений морфотипов тезиограмм в соматических клетках, с использованием кристаллографического метода, позволяет выявить начальный этап сенсибилизации или аллергический фон у больных с лямблиозом.
2. Сравнительный анализ морфометрических признаков кристаллических налетов слюны позволил выявить особенности кристаллизации ротовой жидкости у лиц с лямблиозной инвазией. Таковыми являются: отсутствие выраженной переходной зоны и наличие нетипичных кристаллов в большинстве образцов; меньшая разветвленность дендритов; копьевидные и разветвленные окончания боковых осей кристаллов. Данные особенности кристаллических налетов слюны могут быть использованы для мониторинга эффективности противолямблиозного лечения.