В нашей стране, как и во всем мире, эпидемиологическая ситуация по хроническому вирусному гепатиту С на сегодняшний день весьма неблагополучна [8], что убедительно подтверждается его широкой распространенностью, все более частой регистрацией среди лиц молодого возраста, значительной ролью в формировании цирроза печени и гепатоцеллюлярной карциномы [1, 5]. Высокая заболеваемость, поражение не только взрослого трудоспособного населения, но и детского контингента, определяют актуальность данной проблемы и ее трансформацию из медицинской в медико-социальную.
На сегодняшний день приоритетными при хронических гепатитах являются исследования внутриклеточных процессов в организме [2], позволяющие усовершенствовать применяемые методы лечения, сделать их более обоснованными с точки зрения патогенеза и тем самым облегчить течение и отдалить неблагоприятные исходы этих заболеваний.
Известно, что в патогенезе хронического гепатита С важная роль принадлежит иммунной системе, ее способности к распознаванию возбудителя и дальнейшему формированию полноценного иммунного ответа. Физиологической единицей, в первую очередь контактирующей с вирусом, является иммунокомпетентная клетка, функциональное состояние которой и обусловливает адекватность реагирования. Функциональные возможности лимфоцита, как и любой другой клетки организма, в значительной степени определяются ее внутриклеточным метаболизмом, обеспечиваемым, в числе прочего, определенным уровнем липидного спектра [7].
Несмотря на многочисленные исследования, проведенные при хроническом вирусном гепатите С, и на достигнутые успехи в данной области, многие вопросы этой болезни еще не нашли своего окончательного решения. Одним из них является изучение особенностей изменений процессов метаболизма в организме ребенка, зависящих от стадии хронизации указанного заболевания. Использование липидных параметров, определяемых в гепатоцитах и лимфоцитах при разных стадиях хронизации гепатита С, окажет, на наш взгляд, существенную помощь в получении более полной картины метаболических изменений, так как известно, что внутриклеточный обмен в лимфоцитах способен отражать указанные процессы целостного организма [3].
Цель исследования – изучение показателей липидного состава в клетках печени и лимфоцитах крови у детей, больных хроническим гепатитом С, и определение зависимости этих параметров от стадии хронизации заболевания.
Материалы и методы исследования
Обследовано 26 детей в возрасте от 12-и до 16-и лет с диагнозом «Хронический вирусный гепатит C», который устанавливался в условиях специализированного стационара с помощью набора стандартных клинико-биохимических и иммуноферментных методов исследования и подтверждался морфологически при пункционной биопсии печени (под контролем УЗИ) с учетом гистологического индекса степени активности (ГИСА), а также гистологического индекса стадии хронизации (ГИСХ) – по В.В. Серову [6]. При этом у 13 человек определена 2-я стадия хронизации процесса (слабая или умеренная степень активности заболевания с умеренно выраженными фиброзными изменениями в печени) и еще у 13 – 3-я стадия хронизации (слабая или умеренная степень активности с тяжелым фиброзом в печени).
Материал, полученный при биопсиях, использовался и для определения в ткани печени показателей липидного состава клеток. Параметры липидного спектра (фосфолипиды (ФЛ), холестерин (ХОЛ), свободные жирные кислоты (СЖК), триацилглицериды (ТАГ) и эфиры холестерина (ЭХ)) исследовались методом тонкослойной хроматографии на силуфоле с экстракцией из клеток печени липидных фракций по J. Folch et al. [10].
Аналогичным образом перечисленные выше показатели были изучены и в лимфоцитах, выделенных из венозной крови этих же больных на градиенте плотности (1,077 г/мл) фиколл-верографина [9].
Полученные в результате исследований данные были обработаны методами статистического анализа, используемыми в биологии и медицине с применением пакета прикладных программ Statistica [4]. В таблицах представлены среднегрупповые показатели (М) и ошибка средней (m). Оценка достоверности различий проводилась с помощью непараметрического критерия Манна-Уитни.
Результаты исследования и их обсуждение
В результате проведенных исследований выявлен ряд достоверных различий между показателями липидного состава клеток печени в группах, отличающихся друг от друга по стадии хронизации инфекционного процесса (табл. 1).
Таблица 1
Содержание липидов ( %) в клетках печени у детей при разных стадиях хронизации вирусного гепатита С (M±m)
|
Показатели |
2-я стадия хронизации, n=13 |
3-я стадия хронизации, n=13 |
|
1 |
2 |
|
|
ФЛ |
11,96±0,61 |
11,63±0,81 |
|
ХОЛ |
13,92±0,99 |
17,39±1,31 p1<0,05 |
|
СЖК |
16,03±1,23 |
23,01±1,15 p1<0,001 |
|
ТАГ |
18,30±0,91 |
14,93±0,84 p1<0,05 |
|
ЭХ |
40,06±0,64 |
33,05±2,12 p1<0,01 |
|
ХОЛ/ФЛ |
1,19±0,06 |
1,53±0,13 p1<0,05 |
|
СЖК/ТАГ |
0,91±0,10 |
1,56±0,10 p1<0,001 |
Так, например, в клетках печени у больных с 3-й стадией хронизации инфекционного процесса количество ХОЛ определяется на большем уровне, чем в клетках детей со 2-й стадией: 17,39±1,31 и 13,92±0,99, соответственно, p<0,05. За счет повышения количества холестерина при 3-й стадии увеличивается и соотношение ХОЛ/ФЛ, по сравнению с этим же показателем, определяемым при 2-й стадии: 1,53±0,13 и 1,19±0,06, p<0,05. Вместе с тем, содержание ЭХ при 3-й стадии определяется ниже, чем при 2-й: 33,05±2,12 и 40,06±0,64, p<0,01.
Кроме того, при 3-й стадии увеличивается количество СЖК в клетках печени по сравнению со 2-й (23,01±1,15 и 16,03±1,23, p<0,001), а содержание ТАГ, в свою очередь, снижается (14,93±0,84 и 18,30±0,91, p<0,05). В связи с этим, соотношение СЖК/ТАГ у больных с 3-й стадией больше, чем при 2-й: 1,56±0,10 и 0,91±0,10, p<0,001.
Таким образом, в результате наших исследований установлено, что показатели липидного спектра клеток печени у детей с 3-й стадией хронизации вирусного гепатита С отличаются от аналогичных параметров у детей со 2-й стадией хронизации этого заболевания по следующим пунктам:
- более высоким количеством холестерина, и, как следствие, повышенным соотношением ХОЛ/ФЛ, что определяет увеличение микровязкости и снижение проницаемости клеточных мембран (следовательно, и лучшую защиту от перекисного окисления липидов);
- меньшим содержанием эфиров холестерина, что косвенно подтверждает активацию синтеза самого холестерина;
- повышенным содержанием свободных жирных кислот, сниженным количеством триацилглицеридов и увеличенным, в связи с этим, соотношением СЖК/ТАГ, что свидетельствует о преимущественной направленности липидного обмена в сторону липолиза.
При сравнении липидных параметров лимфоцитов в группах больных детей, отличающихся друг от друга по стадии хронизации гепатита С, также выявлены достоверные различия между исследованными показателями (табл. 2).
Таблица 2
Содержание липидов ( %) в лимфоцитах крови у детей при разных стадиях хронизации вирусного гепатита С (M±m)
|
Показатели |
2-я стадия хронизации, n=13 |
3-я стадия хронизации, n=13 |
|
1 |
2 |
|
|
ФЛ |
17,26±0,60 |
31,49±1,33 p1<0,001 |
|
ХОЛ |
22,86±2,39 |
20,35±2,40 |
|
СЖК |
11,36±0,40 |
8,85±0,78 p1<0,01 |
|
ТАГ |
9,30±0,47 |
6,78±0,43 p1<0,001 |
|
ЭХ |
40,20±1,51 |
31,63±1,20 p1<0,001 |
|
ХОЛ/ФЛ |
1,44±0,22 |
0,68±0,09 p1<0,01 |
|
СЖК/ТАГ |
1,15±0,02 |
1,25±0,10 |
Например, количество ФЛ в лимфоцитах детей с 3-й стадией хронизации заболевания больше, чем в лимфоцитах больных со 2-й стадией: 31,49±1,33 и 17,26±0,60, p<0,001. В соответствии с этим, соотношение ХОЛ/ФЛ в этих клетках при 3-й стадии меньше, по сравнению со 2-й (количество ХОЛ недостоверно меньше при 3-й стадии): 0,68±0,09 и 1,44±0,22, p<0,01.
В то же время, содержание СЖК и ТАГ при 3-й стадии хронизации процесса определяется на меньших уровнях, чем при 2-й: СЖК – 8,85±0,78 и 11,36±0,40, p<0,01; ТАГ – 6,78±0,43 и 9,30±0,47, p<0,001.
В свою очередь, количество ЭХ при 3-й стадии меньше, чем при 2-й: 31,63±1,20 и 40,20±1,51, p<0,001.
Таким образом, в результате наших исследований установлено, что отличия параметров липидного спектра лимфоцитов крови детей с 3-й стадией хронизации вирусного гепатита С от аналогичных показателей детей со 2-й стадией хронизации данного заболевания заключаются в следующем:
- повышенном содержании фосфолипидов и меньшем соотношении ХОЛ/ФЛ, что приводит к снижению микровязкости и лучшей проницаемости клеточных мембран лимфоцитов и определяет снижение уровня защиты этих клеток от перекисного окисления липидов;
- меньшем количестве эфиров холестерина, что может указывать на менее интенсивный внутриклеточный метаболизм самого холестерина (содержание ХОЛ при 3-й стадии недостоверно меньше, чем при 2-й), продуктом эстерификации которого и являются ЭХ;
- менее высоком содержании свободных жирных кислот и триацилглицеридов, что может свидетельствовать о менее активном жирнокислотном обмене с одновременным его сдвигом в сторону липогенеза.
В заключение можно отметить, что установленные в результате наших исследований особенности внутриклеточного обмена, характерные для клеток печени и лимфоцитов, в зависимости от стадии хронизации гепатита С у детей 12-16-и лет и проводимые в этом направлении дальнейшие исследования позволят, по-нашему мнению, уточнить некоторые метаболические аспекты патогенеза хронического вирусного гепатита С, обусловленные тяжестью его течения (стадией хронизации), определить новые подходы в лечении и прогнозах течения указанного заболевания в детском возрасте.
Выводы
- Величина показателей липидного состава в клетках печени детей в возрасте 12-16-и лет, больных хроническим вирусным гепатитом С, зависит от стадии хронизации инфекционного процесса. Изменения липидных параметров, выявляемые при 3-й стадии хронизации, свидетельствуют о более глубоком, чем при 2-й, функциональном поражении клеток печени.
- В лимфоцитах крови у детей 12-16-и лет при хроническом вирусном гепатите С изменения липидных показателей также зависят от его стадии хронизации и предполагают наличие более выраженных метаболических нарушений в этих клетках при 3-й стадии, по сравнению со 2-й.