Введение
Цитомегаловирусная инфекция (ЦМВИ) является одной из наиболее частых врожденных инфекций и встречается у 0,2-2,5% новорожденных детей. Высокая частота внутриутробного инфицирования вирусом цитомегалии обусловлена различными факторами, в том числе эпидемиологическими, которые включают широкое распространение ЦМВИ в человеческой популяции, значительную вариабельность цитомегаловируса (ЦМВ), разнообразие механизмов и путей передачи инфекции, преобладание субклинических форм [4].
Реализация внутриутробной инфекции у новорожденного во многом зависит от его иммунитета, который определяется состоянием здоровья матери [9]. Носительство хронической инфекции у матери во время беременности способствует длительной внутриутробной антигенной стимуляции иммунной системы плода и приводит к нарушениям формирования адекватного иммунного ответа новорожденного [3, 10, 11].
Немаловажное значение в процессе реализации инфекционного процесса играют инициация свободнорадикального окисления и протективная роль системы антиоксидантной защиты (АОЗ). Практически при любой патологии и любом неблагоприятном (стрессовом) воздействии на организм активируются процессы перекисного окисления липидов (ПОЛ), что приводит к накоплению токсических веществ, которые относят к эндотоксинам [6].
Исследования, проведенные нами ранее, показали, что вирусная инфекция оказывает неблагоприятное влияние на формирование липидного статуса у новорожденных детей [7]. Одновременно с этим установлено, что дислипедимия у детей при рождении является одной из причин дизадаптационного синдрома у них и сопровождается активацией процессов ПОЛ [12].
Целью работы явилось изучение активности процессов ПОЛ и АОЗ в крови пуповины новорожденных от матерей с ЦМВИ.
Материал и методы исследования
В процессе работы обследовано 82 новорожденных ребенка, 42 из которых родились от матерей с ЦМВИ (титр антител IgG к ЦМВ 1:1600) – основная группа. Контрольную группу составили 42 новорожденных от матерей без ЦМВИ.
Интенсивность процессов ПОЛ оценивали по содержанию ТБК-активных продуктов (ТБК-АП), концентрацию которых в мембранах эритроцитов крови пуповины определяли с применением тиобарбитуровой кислоты [5]. Об интенсивности АОЗ сыворотки крови судили по содержанию α-токоферола [13] и олеиновой кислоты, концентрацию которой выявляли методом газожидкостной хроматографии на хроматографе «Кристалл 2000м» (Россия) с пламенно-ионизационным детектором.
Содержание фосфолипазы А2 в крови пуповины новорожденных определяли иммуноферментным методом анализа с помощью наборов реактивов фирмы «Cayman chemical» (США). Концентрацию лизофосфатидилхолина (ЛФХ) в мембранах эритроцитов крови пуповины изучали методом тонкослойной хроматографии.
Все исследования были проведены с учетом требований Хельсинской декларации Всемирной ассоциации «Этические принципы проведения научных медицинских исследований с участием человека» с поправками 2008 г. и «Правилами клинической практики в Российской Федерации», утвержденные Приказом Минздрава РФ от 19.06.2003 г. № 226.
Все расчеты проводились с использованием программного обеспечения Statistika 6,0. Проверку нормальности распределения проводили по критерию Колмагорова-Смирнова. Анализируемые в статье данные имели нормальное распределение, поэтому проводился расчет средней арифметической (М) и ошибки средней арифметической (m). Проверку гипотезы о статистической значимости различных двух выборок проводили с помощью критерия t-Стьюдента и считали значимыми при p < 0,05.
Результаты исследования и их обсуждение
Как показали исследования, у новорожденных от матерей с ЦМВИ наблюдалась интенсификация процессов ПОЛ, о чем свидетельствовал рост концентрации ТБК-АП более чем в 2 раза (p < 0,001), по сравнению с показателями контрольной группы (см. таблицу).
Интенсивность процессов ПОЛ и АОЗ в крови пуповины новорожденных от матерей с ЦМВИ
|
Показатель |
Контрольная группа |
Основная группа |
|
ТБК-АП, ммоль/л |
11,40±0,45 |
24,20±0,60; p < 0,001 |
|
Фосфолипаза А2, нг/мл |
0,20±0,02 |
0,42±0,02; p < 0,001 |
|
α-токоферол, ммоль/л |
1,84±0,04 |
1,35±0,03; p < 0,01 |
|
Олеиновая кислота, % |
10,0±0,82 |
7,20±0,60; p < 0,001 |
|
ЛФХ, % |
6,70±0,10 |
13,80±0,12; p < 0,001 |
Примечание: p – значимость различий с контрольной группой.
Одной из систем защиты в организме человека является α-токоферол, нейтрализующий токсические продукты, которые образуются в процессе ПОЛ. Основным местом фиксации в клетке α-токоферола являются биологические мембраны. Находясь в липидной фазе биологических мембран, он взаимодействует с токсическими радикалами, предохраняя неповрежденные фосфолипиды, в частности, жирные кислоты, от переокисления. В связи с этим, α-токоферол способен оказывать регулирующее влияние на жирно-кислотный состав фосфолипидов, обладая мембраностабилизирующими свойствами [1].
Изучение содержания α-токоферола в сыворотке крови пуповины новорожденных основной группы показало снижение концентрации данного антиоксиданта в 1,3 раза (p < 0,01), по сравнению с контролем (см. таблицу).
Вместе с тем, необходимо отметить, что АОЗ клетки определяется не только уровнем α-токоферола, но и количеством эндогенно синтезируемой олеиновой кислоты [8]. Поэтому было проведено изучение концентрации олеиновой кислоты в сыворотке крови пуповины новорожденных от матерей с ЦМВИ. У новорожденных основной группы в крови пуповины отмечалось снижение содержания олеиновой кислоты в 1,4 раза (p < 0,001), по сравнению с аналогичным показателем контрольной группы (см. таблицу).
Таким образом, в крови пуповины новорожденных от матерей с ЦМВИ напряженность окислительного стресса, регистрируемая по динамике уровня α-токоферола, концентрации ТБК-АП, прогрессивно увеличивается при титре антител IgG к ЦМВ 1:1600. Однако, содержание антиоксиданта α-токоферола недостаточно для поддержания гомеостаза организма, что может приводить к истощению антиоксидантной защиты и будет способствовать росту процессов радикалообразования с формированием конечных продуктов. При всем этом, α-токоферол является антиоксидантом, который должен поступать извне, в отличие от олеиновой кислоты, синтезируемой в организме. Возможно, недостаточность функционирования АОЗ в крови пуповины новорожденных от матерей с ЦМВИ, включает дополнительное использование олеиновой кислоты, для ингибирования токсинов, находящихся в кровяном русле, а, следовательно, более лабильное в регуляторном отношении. Поэтому можно предположить, что снижение концентрации олеиновой кислоты в крови пуповины новорожденных от матерей с ЦМВИ является компенсаторным механизмом, направленным на уменьшение повреждающего действия токсических радикалов, образующихся в результате активации процессов ПОЛ.
Особое значение среди ферментов, участвующих в липидном обмене занимает фосфолипаза А2. За счет роста активности этого фермента происходит снижение уровня ненасыщенных жирных кислот в условиях повышенного образования фосфолипидов. Биохимические исследования показали, что на фоне увеличения в крови пуповины новорожденных основной группы конечных продуктов ПОЛ и снижения плазменных систем АОЗ отмечался выраженный рост активности фосфолипазы А2 более чем в 2 раза (p < 0,001), по сравнению с аналогичным показателем контрольной группы (см. таблицу).
Субстратом для фосфолипазы А2 являются фосфолипиды клеточных мембран, после гидролиза и отщепления которых свободных жирных кислот образуются лизофосфолипиды. Эти продукты действуют либо как внутриклеточные вторичные мессенджеры, либо метаболизируются в провоспалительные липидные медиаторы, включая эйкозаноиды, фактор активации тромбоцитов и лизофосфатидную кислоту [2].
В ходе исследования в крови пуповины новорожденных основной группы было выявлено увеличение содержание ЛФХ в 2 раза (p < 0,001), по сравнению с контролем (см. таблицу). ЛФХ является медиатором широкого спектра клеточных процессов провоспалительного характера. Образование избыточного содержания ЛФХ с участием фосфолипазы А2 способствует тканевому воспалению и нарушению гемостаза [2]. Следовательно, увеличение концентрации ЛФХ в крови пуповины новорожденных от матерей с ЦМВИ, может явиться неблагоприятным фактором гестационного процесса.
Обобщая полученные результаты исследования, можно заключить, что у новорожденных от матерей с ЦМВИ, наблюдается усиление липопероксидации на фоне недостаточной компенсации антиоксидантной системой с избыточным накоплением в крови пуповины повреждающих факторов: ТБК-АП, ЛФХ, что может явиться результатом окислительного стресса в перинатальном периоде.