В литературных источниках [1, 2, 3, 7] показатели синовиальной жидкости (СЖ) представлены либо устаревшими данными, либо данными без указания использованного метода. В табл. 1 мы приводим ряд референтных значений и результаты собственных исследований СЖ людей, не имевших зарегистрированной суставной патологии.
Мы не оценивали достоверность различий в представленных группах сравнения математическими методами вследствие применения разной методической базы в литературных данных.
Следует заметить, что наши данные не противоречат представленным литературным. Однако ряд показателей, безусловно, нуждается в методическом уточнении.
Материалы и методы исследования
Материал исследования составил от 31 трупа внезапно погибших людей обоего пола (23 мужчины и 8 женщин) в возрасте от 22 до 78 лет, не имевших зарегистрированной экспертом суставной патологии.
Статистическая обработка полученных результатов проводилась методом вариационной статистики, применяемым для малых выборок, с принятием вероятности р, равной 0,05. Для каждой группы наблюдений рассчитывали среднюю арифметическую, среднее квадратическое отношение, ошибку средней. Для исследования корреляции и построения корреляционной матрицы разнородных признаков программное обеспечение выбирает следующие правила вычисления коэффициентов корреляции: при вычислении корреляции двух количественных параметров – коэффициент Пирсона; при вычислении корреляции порядковых/количественных и порядковых параметров – коэффициент ранговой корреляции Кендалла; при вычислении корреляции двух дихотомических признаков – коэффициент сопряженности Бравайса; при вычислении корреляции количественных/порядковых и дихотомических признаков – точечно-бисериальная корреляция. Для идентификации программой шкалы измерения признаков на этапе выбора исходных данных был введен интервал признаков.
Результаты исследования и их обсуждение
Значительно ниже, чем в литературе, мы оцениваем концентрацию общего белка (ОБ) в синовии. Чаще всего используемые для определения концентрации ОБ методы – биуретовый и Лоури – отличаются разной степенью чувствительности и специфичности. Определение белка по Лоури отличается большей чувствительностью, но меньшей специфичностью, чем биуретовый метод [6]. В ряде источников [2], так же как и в нашей работе, был использован биуретовый метод.
Особый интерес представляет количественное определение основного специфического компонента СЖ – несульфатированного гликозаминогликана – гиалуроновой кислоты (ГК) (полимер дисахаридных последовательностей ацетилированного аминосахара и уроновой кислоты). Известно, что в состав синовии он входит в виде комплекса гиалуронат-протеин СЖ и встроен в поверхность суставного хряща. В приводимых источниках [2] определение ГК начинали с осаждения специфическими осадителями, давая количественную оценку ее содержания по определению уроновых кислот [9]. В наших данных мы приводим количество уроновых кислот после определения в нативной синовии, принимая во внимание то, что осадители гликозаминогликанов не специфичны для их сульфатированных и несульфатированных форм. О количестве сульфатированных гликозаминогликан мы судили по отношению сульфатов к уроновым кислотам. Определение сиаловых кислот в нативной синовии характеризует их общее содержание, т.е. суммированную концентрацию свободных и белковосвязанных сиаловых кислот в составе гликопротеидов. Поскольку гликопротеидные белки плазмы запускают цитокиновый каскад воспалительной реакции после десиалирования, c их определением в синовии закономерно ожидать связи с клиническими характеристиками заболеваний суставов. Мы не смогли сопоставить полученные нами данные по активности протеолитических ферментов, так как в референтных источниках [3] показатели протеолитической активности приводятся со ссылкой на субстрат протаминсульфат (а в наших исследованиях субстратом служил гемоглобин) либо без ссылки на субстрат.
Вследствие того, что возрастные нарушения метаболизма суставных тканей в значительной степени определяют развитие дегенеративно-дистрофических процессов в суставах, а женщины страдают остеоартрозом почти в 2 раза чаще мужчин и в соответствии с поставленными в нашей работе задачами, мы оценили возрастные и половые особенности биохимического состава СЖ коленного сустава человека в норме.
Мы не обнаружили достоверных отличий в биохимическом составе СЖ и женщин по определенным нами показателям, что иллюстрируем данными, приведенными в табл. 2.
Таблица 1
Основные химические компоненты синовиальной жидкости здоровых людей (в сопоставлении данных разных авторов и результатов собственных исследований)
|
Показатели |
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
|
рН |
7,29–7,45 |
||||
|
Вязкость, мм, 2/с |
26,3 ± 3,13 |
||||
|
Белок общий, г/л (ОБ) |
20 |
20,0 |
10–20 |
20,0 |
17,2 ± 0,94 |
|
Белок, фракции, %, Альбумины |
72,0 |
65–75 |
72,0 |
65,5 ± 0,89 |
|
|
α1-глобулины |
4,5–4,9 |
4,5–4,9 |
5,0 ± 0,57 |
||
|
α2-глобулины |
3,2–3,8 |
3,2–3,8 |
5,3 ± 0,34 |
||
|
β-глобулины |
9,2–10,0 |
9,2–10,0 |
11,0 ± 0,86 |
||
|
γ-глобулины |
9,3–12,4 |
9,3–12,4 |
13,4 ± 0,56 |
||
|
А/G |
1,97 ± 0,08 |
||||
|
Гиалуроновая кислота, г/л |
3,0 |
2,75–2,85 |
1,70–2,20 2,75–3,00 |
6,13 ± 0,41 |
|
|
УК/ ОБ |
0,42 ± 0,08 |
||||
|
Сульфаты,ммоль/л, г/л |
11,3 ± 1,25 1,08 ± 0,04 |
||||
|
Сульфаты/ УК |
1,62 ± 0,13 |
||||
|
Сиаловая кислота, ммоль/ г/л (СК) |
0,52–1,36 0,16–0,42 |
1,16 ± 0,04 0,36 ± 0,01 |
Примечания. * – жирным шрифтом приведены цифры, полученные из авторских, после пересчета размерности,
** состав белковых фракций в источниках 2 и 4 приведен по данным K. Kleesiek (1978).
1 – В.Н. Павлова, 1980 [7]
2 – Герасимов, Фурцева, 1986 [3]
3 – В.В. Базарнов, 1999 [1]
4 – ЦИТО, 1999 [2]
5 – собственные данные
Таблица 2
Биохимические показатели синовиальной жидкости коленных суставов мужчин и женщин
|
Показатель |
Мужчины (n = 23) |
Женщины (n = 8) |
|
Общий белок г/л (ОБ) |
17,61 ± 1,09 |
18,99 ± 2,72 |
|
Белок, фракции, % Альбумины |
63,8 ± 1,4 |
65,4 ± 1,6 |
|
α1-глобулины |
5,8 ± 0,9 |
4,8 ± 1,2 |
|
α2-глобулины |
5,7 ± 0,4 |
4,8 ± 1,0 |
|
β-глобулины |
11,7 ± 1,4 |
10,6 ± 1,2 |
|
γ-глобулины |
13,0 ± 1,6 |
14,3 ± 1,7 |
|
УК, мМ/л |
6,07 ± 0,56 |
6,15 ± 0,88 |
|
СК, мМ/л |
1,21 ± 0,05 |
1,31 ± 0,5 |
|
Сульфаты, мМ/л |
10,86 ± 1,05 |
7,01 ± 1,52 |
|
Сульфаты/УК |
1,05 ± 0,40 |
0,78 ± 0,05 |
|
УК/ОБ |
0,24 ± 0,03 |
0,20 ± 0,07 |
Таблица 3
Значения корреляционной связи между биохимическими показателями синовиальной жидкости коленных суставов человека с показателем возраста
|
Показатель |
Коэффициент Пирсона |
Значимость корреляции |
|
Общий белок, г/л (ОБ) |
0,06 |
0,38 |
|
Белок, фракции, %, Альбумины |
– 0,45 |
0,94 |
|
α1-глобулины |
0,40 |
0,09 |
|
α2-глобулины |
– 0,45 |
0,94 |
|
β-глобулины |
0,11 |
0,36 |
|
γ-глобулины |
0,47 |
0,05 |
|
УК |
– 0,32 |
0,86 |
|
СК |
0,41 |
0,05 |
|
Сульфаты |
– 0,07 |
0,60 |
|
Сульфаты/УК |
0,35 |
0,14 |
|
УК/ОБ |
0,26 |
0,22 |
Примечание. Жирным шрифтом выделены значения коэффициента корреляции, значимо отличающиеся от нуля при уровне значимости p < 0,05.
Таблица 4
Концентрации γ-глобулинов и сиаловых кислот в синовиальной жидкости коленного сустава людей разных возрастных групп
|
Показатель |
1 группа, n = 5 (22–35 лет) |
2 группа, n = 13 (36–56 лет) |
3 группа, n = 8 (56–70лет) |
4 группа, n = 5 (более 70 лет) |
|
γ-глобулины, % |
11,85 ± 0,21 |
12,50 ± 0,31 |
12,88 ± 0,43 |
12,9 ± 2,33 |
|
СК, мМ/л |
1,07 ± 0,01 |
1,14 ± 0,05 |
1,28 ± 0,06 |
1,32 ± 0,30 |
Определяя корреляционную связь возраста и биохимического состава синовии, мы рассчитывали коэффициент и значимость корреляции для отдельных биохимических показателей, а также отношений уроновых кислот к общему белку и сульфатов к уроновым кислотам. Первое отношение мы принимали как показатель накопления продуктов метаболизма протеогликанов, а второе – как степень сульфатирования гликозаминогликанов синовии. Результаты расчета показателей корреляции представлены в табл. 3. Наиболее изменяющимися с возрастом показателями являются γ-глобулиновая фракция белка и сиаловые кислоты. Для отношения сульфатов к уроновым кислотам высок коэффициент корреляции при недостоверном уровне значимости. По остальным показателям не обнаружено значимой корреляционной связи с возрастом. Полученные данные позволяют оценивать корреляционную связь выделенных показателей с возрастом как значимую. Можно предположить, что с возрастом в СЖ происходит некоторое накопление сиалосодержащих соединений и γ-глобулинов. Очевидно, это является следствием возрастания количества гликопротеинов, возможно, являющихся иммуноглобулинами. Одной из их биологических функций является утилизация продуктов распада белковой природы, которые могут поступать из поврежденных тканей в ходе инволюционного процесса при старении [4, 5]. Подчеркиваем, однако, что достоверных различий в уровне указанных соединений в СЖ людей разного возраста мы не обнаружили.
Для выяснения нормативных значений показателей, которые являются наиболее связанными с возрастом, мы оценили достоверность различий концентраций СК и γ-глобулинов в разных возрастных группах. Распределение материала по группам было произведено по схеме, рекомендованной симпозиумом по возрастной периодизации в институте возрастной физиологии АМН СССР [8]. При возрастании этих показателей, достоверных различий в группах мы не обнаружили (табл. 4).
Таким образом, проведенные исследования не выявили достоверных различий показателей белкового спектра и углеводсодержащих соединений СЖ коленных суставов здорового человека по признаку пола и возраста, а наиболее тесные корреляционные связи с возрастом человека выявлены для показателей γ-глобулинов и сиаловых кислот.
Исходя из представленных литературных данных, нетрудно заметить, что при большом разнообразии используемых методов и методик биохимических исследований, информативность и диагностическая значимость данных исследований для практической деятельности не определена.