Scientific journal
Advances in current natural sciences
ISSN 1681-7494
"Перечень" ВАК
ИФ РИНЦ = 0,791

СOMPARATIVE ANALYSIS OF PRIMERY STRUCTURE OF GLUCOAMYLASES FROM ASPERGILLUS AWAMORI AND SACCHAROMYCES CEREVISIAE

Kozhokina O.M. Kovaleva T.A.
It has carried out comparison of the primary structure of glucoamylases from Aspergillus awamori and Saccharomyces cerevisiae with use of programme Cene Bee on the basis of sequening. It has obtained estimation of the degree of homology, it has confirmed probablibility of participance of Asp, Glu, Trp residues in the catalysis of hydrolysis of starch. Keywords: glucoamylase, primary structure, comparative analysis, homology

Исследование свойств глюкоамилаз различного происхождения приобретает особую значимость в связи с применением их в различных отраслях промышленности в роли биокатализаторов. Поиск путей регулирования биокаталитической активности ферментов неразрывно связан с расшифровкой закономерностей и молекулярного механизма катализа реакции гидролиза субстрата. Для решения данной задачи, наряду с определением функциональных свойств энзимов, необходимо проведение их структурного анализа.

Для выявления константных областей аминокислотных последовательностей ферментов с помощью программы Gene Bee (http://www.genebee.msu.ru/genebee.html) осуществлено сравнение сиквенсов субъединицы глюкоамилазы из Aspergillus awamori X100 и молекулы глюкоамилазы из Saccharomyces cerevisiae, размещенных в INTERNET National Center for Biotechnology Information (http://www.ncbi.
nlm.nih.gov/Entrez
) и Protein Brookhaven Database (http://www.rcsb.org/).

Сравнительный анализ первичных структур глюкоамилаз из Asp. awamori и S. cerevisiae показал их гомологичность на 13,1%. Наиболее часто на протяжении рассматриваемых полипептидных цепей наблюдаются корреляции одиночных гомологичных остатков; встречаемость гомологичных дуплетов и триплетов гораздо ниже (табл. 1).

Таблица 1

Частота встречаемости гомологичных аминокислотных остатков
в первичных структурах глюкоамилаз из Aspergillus awamori и Saccharomyces cerevisiae

Аминокислота

Частота встречаемости

Аминокислота

Частота встречаемости

аланин

11

триптофан

4

валин

8

аспарагин

-

лейцин

4

глутамин

2

изолейцин

-

серин

47

глицин

5

треонин

36

пролин

12

лизин

1

цистеин

2

аргинин

-

метионин

-

гистидин

-

аспарагиновая кислота

8

глутаминовая кислота

7

фенилаланин

-

тирозин

2

Из табл. 1 видно, что основное количество гомологичных звеньев представлено остатками Ser и Thr. Данные аминокислоты являются гидроксилсодержащими и ответственны за активное взаимодействие белковой макромолекулы с молекулами воды, обеспечивая хорошую растворимость фермента. Кроме того, Ser и Thr способны к образованию эфиров фосфорной и органических кислот и служат местом присоединения углеводных компонентов в гликопротеидах [1, 3].

Наличие значительного числа гомологичных остатков Asp и Glu, а также Trp позволяет предположить участие данных аминокислот в катализе реакции гидролиза крахмала, осуществляемом глюкоамилазами как плесневого, так и дрожжевого происхождения [1, 3].

В табл. 2 представлен полный аминокислотный состав глюкоамилаз из Asp. awamori и S. cerevisiae. Анализ аминокислотного состава глюкоамилаз различного происхождения показал высокую устойчивость фермента из Asp. awamori к органическим растворителям, одна субъединица которого содержит 27,15% остатков с алкильными боковыми цепями (Ala, Val, Leu, Ile, Met); для молекулы глюкоамилазы из S. cerevisiae данная величина составляет лишь 17,65%. Большое количество остатков Ser и Thr (для субъединицы молекулы глюкоамилазы из Asp. awamori 14% и 12% соответственно, для целой молекулы из S. cerevisiae - 25,7% и 25,32%) обеспечивает гилратацию белковой глобулы вследствие образования системы водородных связей.

Таблица 2

Аминокислотный состав глюкоамилаз из Aspergillus awamori и Saccharomyces cerevisiae

 

Аминокислота

Aspergillus

awamori (субъединица)

Saccharomyces cerevisiae

количество

% от общего числа

количество

% от общего числа

аланин

59

9,59

85

6,33

валин

39

6,34

94

7

лейцин

43

7

22

1,64

изолейцин

25

4,07

32

2,38

глицин

47

7,64

43

3,2

пролин

24

3,9

141

10,5

цистеин

9

1,46

20

1,49

метионин

1

0,16

4

0,3

гистидин

5

0,81

5

0,37

фенилаланин

21

3,41

14

1,04

тирозин

27

4,39

22

1,64

триптофан

19

3,09

8

0,6

аспарагин

21

3,41

35

2,61

глутамин

17

2,76

19

1,41

серин

86

13,98

345

25,69

треонин

73

11,87

340

25,32

лизин

12

1,95

30

2,23

аргинин

18

2,93

1

0,07

аспарагиновая кислота

44

7,15

14

1,04

глутаминовая
кислота

25

4,07

69

5,14

Общее число

615

1343

Из табл. 2 видно, что в состав субъединицы молекулы глюкоамилазы из Asp. awamori входят 9 остатков цистеина, SH-группы которых образуют 3 дисульфидных мостика и свободную тиольную группу в каталитическом домене и 1 S-S связь в крахмалсвязывающем участке. В молекуле энзима из S. cerevisiae имеется 20 Cys (по 10 на каждую субъединицу). Однако, возможно не все остатки Cys участвуют в образовании дисульфидных связей. Вероятно, число S-S мостиков в расчете на одну субъединицу составляет не более трех [2, 4-6].

Обнаружено, что количество остатков Asp, Glu в молекуле глюкоамилазы из Asp. awamori в 4 раза превышает данную величину для фермента дрожжевого происхождения.

Таким образом, в ходе проведенных исследований установлена гомологичность первичных структур глюкоамилаз из Asp. awamori и S. cerevisiae на ~13%. Обнаружена высокая степень корреляции одиночных аминокислотных остатков. Выявлено, что основное количество гомологичных звеньев представлено остатками Ser и Thr, обеспечивающих хорошую гидратацию ферментов и служащих местами присоединения углеводных компонентов в гликопротеидах. Наличие значительного числа гомологичных остатков Asp и Glu, а также Trp позволяет предположить участие данных аминокислот в катализе реакции гидролиза крахмала, осуществляемом глюкоамилазами как плесневого, так и дрожжевого происхождения.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ:

  1. Галич И.П. Амилазы микроорганизмов. Киев: Наук. думка, 1987. 192 с.
  2. Кантор Ч. Биофизическая химия. М.: Мир, 1984. Т. 1. 336 с.
  3. Квеситадзе Г.И. Грибные и бактериальные амилазы. Тбилиси: Мецниереба, 1984. 154 с.
  4. Попов Е.М. Структурно-функцио-нальная организация белков. М.: Наука, 1992. 358 с.
  5. Шерман С.А. Конформационный анализ и установление пространственной структуры белковых молекул. Минск: Наука и техника, 1989. 240 с.
  6. Шульц Г. Принципы структурной организации белков. М.: Мир, 1982. 360 с.