Изучение способности клеток крови продуцировать цитокины в условиях in vitro дает представление о характере изменений цитокинового статуса у больных (НП). Исследование спонтанной и индуцированной ЛПС продукции цитокинов проводилось при культивировании цельной крови (для максимального приближения эксперимента к условиям in vivo). Учитывая, что скорость экспрессии, секреции и продукции различных цитокинов неодинакова, предварительно было проведено исследование оптимального времени взаимодействия крови с ЛПС. Как оказалось, для IL-1a и IL-8 оптимальным было культивирование клеток в течение 6 часов, тогда как для исследования IL-6, IL-4, IL-10 и IFNg - 48 часов.
В результате исследований установлено, что у пациентов с НП резко повышается спонтанная способность клеток периферической крови продуцировать большинство цитокинов, за исключением IFNg и IL-1a, что является признаком их активации in vivo. При исследовании спонтанной продукции IL-6 клетками крови больных с НП зафиксировано существенное (в десятки раз) его повышение по сравнению со здоровыми донорами (943,2±16,8 пг/мл и 38,5±1,4 пг/мл соответственно). Установлена достоверная прямая корреляционная зависимость между спонтанной продукцией и уровнем циркулирующего в крови IL-6 в (r=0,77; p<0,001). Однако величина индуцированной продукции IL-6 не зависела от степени тяжести НП. При анализе спонтанной продукции другого воспалительного цитокина - IL-8 были установлены изменения, близкие с таковыми по уровню IL-6: происходило достоверное повышение спонтанной продукции этого цитокина клетками крови больных. Индуцированная ЛПС продукция IL-8 у пациентов с НП, напротив, была снижена. При утяжелении состояния больных с НП зафиксировано нарастание спонтанной секреции IL-8 на фоне снижения способности клеток к его продукции под воздействием дополнительной антигенной стимуляции ЛПС. Анализ спонтанной способности клеток периферической крови секретировать IL-4 показал, что клеточная активность различна у больных НП и здоровых людей. Так, у пациентов с НП спонтанная продукция IL-4 усиливалась (p<0,001), а индуцированная - не отличалась от показателей контроля (7,07±0,4 пг/мл против 7,86±0,2 пг/мл, р>0,05). Особое внимание в исследовании было обращено на динамику IL-10, который является продуктом Th2-лимфоцитов и макрофагов и мощно ингибирует клеточно-опосредованный иммунный ответ. У больных с НП зафиксировано повышение и спонтанной, и индуцированной продукции IL-10. Однако, индекс ЛПС-стимуляции продукции IL-10 был более чем в два раза ниже, чем у здоровых людей (1,5±0,05 против 3,8±0,1, р<0,01). При этом оказалось, что у больных с НП разной степени тяжести индекс ЛПС стимуляции IL-10 был практически одинаковым. Крайне низкой оказалась и способность клеток больных НП отвечать на дополнительный антигенный стимул продукцией иммунного интерферона (30,0±4,8 пг/мл против 295,0±24,1 пг/мл у здоровых, р<0,001). Выявлена прямая корреляционная взаимосвязь между низкой продуцирующей способности клеток крови и сывороточным уровнем ИНФg (r = +0,83, p<0,01).
Таким образом, усиление спонтанной продукции цитокинов и нарушение их соотношения у больных НП свидетельствует об активации Th2 клеток (увеличение продукции IL-6, IL-4, IL-10). Это в свою очередь указывает на дисбаланс регуляторных процессов, ответственных за поддержание оптимального уровня клеточной активности. Последний развивается на фоне снижения спонтанной продукции ИНФ g, что усугубляет иммунопатологические нарушения. Отсутствие адекватного ответа клеток на ЛПС стимуляцию позволяет судить об истощении их резервных возможностей и «иммунологическом парализисе». Указанные изменения являются основанием для использования в комплексном лечении тяжелых форм НП иммунокоррегирующих препаратов с заместительно-инициирующим действием.