Материалы и методы
Животные. Мыши линии СВА. Животные содержались в стандартных условиях: в пластиковых клетках с опилками, имели постоянный доступ к воде и пище.
Культивирование ДК. ДК получали из клеток костного мозга мышей линии СВА, используя стандартную методику культивирования. В качестве индукторов созревания использовали рекомбинантные GM - CSF и IL - 4 по 10 нг/мл, а в качестве факторов дозревания использовали ВП-4 (50 мкг/мл), липополисахарид (ЛПС) К. pneumoniae (0,125 мкг/мл) или фактор некроза опухоли (TNF-α) для индукции созревания ДК.
Результаты
Фазово-контрастная микроскопия клеток, полученных при данных условиях, выявляла звездчатые клеточные формы с характерными цитоплазматическим отростками. Клетки имели вуалевидный характер с многочисленными длинными тонкими отростками на поверхности.
Дендритные клетки, обладающие фенотипическими признаками незрелых, имели низкий уровень экспрессии костимулирующих и MHC молекул. Использование ЛПС К. pneumoniae, вакцины ВП - 4 и TNF - α в качестве индукторов созревания позволило генерировать зрелые ДК, характеризующиеся типичным фенотипом CD34-, CD38+, CD40+, CD80+, CD86+, MHC I+, MHC II+, F4/80low.
ДК обладали высокой фагоцитарной активностью по отношению к частицам латекса и условно - патогенным микроорганизмам. Способность к фагоцитозу снижалась по мере созревания клеток.
В культуральной среде со зрелыми ДК достоверно повышался уровень ряда цитокинов (IL - 1β, IL-6, IL-12, INF-γ, и TNF-a) по сравнению с незрелыми ДК, при этом наиболее высокими были концентрации. Содержание IL-2, IL-10 не претерпевало существенных изменений, в то время как продукция IL-4 зрелыми ДК была достоверно ниже, чем у незрелых форм.
Таким образом, из клеток костного мозга при воздействии стандартных ростовых факторов и использовании в качестве индуктора созревания ЛПС К. pneumoniae, были получены зрелые ДК, с высокой функциональной активностью.