Условно-патогенные грибы рода Candida в качестве сапрофитов часто находятся на поверхности слизистых оболочек человека и животных, однако при некоторых нарушениях функции иммунной системы они вызывают поражения слизистых оболочек, кожи и внутренних органов. Считается, что большинство штаммов, выступающих в качестве причины заболевания, являются комменсалами самих пациентов. В тоже время, возрастающая частота кандидозов, в т.ч. вызванных Candida non albicans, может свидетельствовать об импорте инфекции и (или) о замене, в силу каких-то обстоятельств, «добропорядочных» комменсалов на агрессивные («дикие») штаммы. Природные штаммы грибов и других микроорганизмов становятся клинически значимыми и, пройдя определенную ступень адаптации в организме человека, они могут стать более жесткими конкурентами в отношении клинических изолятов, т.к. имеют более выраженную конкурентоспособность.
Начальным и критическим по своему значению этапом колонизации слизистых оболочек грибами Candida, определяющим возможность дальнейшего развития микотического процесса, является адгезия (прикрепление) грибов к поверхности эпителиальных клеток. На этот процесс оказывают влияние многообразные факторы, в т.ч. характер и температура инкубационной среды.
Т.о., целью данного исследования было оценить влияние температурного режима инкубации на адгезивную способность различных изолятов грибов рода Candida к буккальному эпителию. Буккальный эпителий был выбран в качестве универсальной модели для оценки адгезивных свойств грибов. Ранее нами было показано, что вагинальные изоляты проявляют одинаковую адгезивную способность к буккальному и вагинальному эпителию (Хомич Ю.С., Бурмистрова А.Л., 2005).
Материалы и методы
Было изучено 72 культуры грибов. Из них:
- 35 культур выделены из влагалища женщин (18 - 35 лет) с различной генитальной патологией (эрозии шейки матки, вагиниты, кольпиты), имеющих дисбиоз влагалища;
- 20 культур выделены из ротовой полости условно здоровых лиц;
- 15 природных изолятов грибов рода Candida, выделенных из корма рыб, имаго комаров и ЖКТ кивсяка;
- 2 штамма C.albicans АТСС 2091 и 10231.
Все вагинальные и оральные изоляты были представлены видом Candida albicans. Природные штаммы были любезно предоставлены кафедрой биологии почв факультета почвоведения МГУ. Среди них было 11 коллекционных (три культуры - Candida guilliermondii, четыре - Candida tropicalis, одна - Candida maltosa, одна - Candida santamariae, две - Rhodotorula rubra) и 4 музейные культуры. Музейные культуры были реидентифицированы нами как C.guilliermondii (2), R. rubra и Candida kefyr («Auxocolor»).
Все культуры оценивали по адгезивной способности к буккальному эпителию при рН 7,0 (физиологический рН ротовой полости) при 24°С и 37°С (температура тела человека). Эпителиальные клетки собирали с помощью сухого стерильного тампона из хлопка со слизистой внутренней поверхности щеки одного условно здорового донора.
С целью определения индекса адгезии (ИА) смешивали равные объемы эпителия и грибов при соотношении клеток 1:100 соответственно. Пробирки встряхивали в ротаторе 1 час при 24°С и 37°С, 70 об/мин. Затем готовили мазок, который окрашивали метиленовой синью. Для 100 эпителиальных клеток подсчитывали ИА - среднее количество адгезированных грибов в пересчете на один эпителиоцит.
Таблица 1.
Индекс адгезии различных изолятов грибов к буккальному эпителию
|
|
ИА при 37°С |
ИА при 24°С |
|
Вагинальные изоляты (n=35) |
6,2±0,7 |
7,3±0,7 |
|
Оральные изоляты (n=20) |
11,3±1,6 |
13,2±1,8 |
|
Природные изоляты (n=15) |
3,8±0,6* |
12,8±1,2* |
|
Штаммы АТСС (n=2) |
4,0±0,1** |
8,1±0,1** |
*p<0,005
** p<0,005
Результаты
Как видно из таблицы:
- Наибольший ИА к буккальному эпителию при 37°С показали оральные изоляты (11,3); при 24°С - оральные и природные изоляты (13,2 и 12,8 соответственно).
- Природные изоляты и АТСС штаммы показали достоверное увеличение адгезивной способности при температуре 24°С в сравнении с 37°С.
- Адгезивная способность клинических штаммов грибов также увеличивалась при 24°С в среднем в 1,2 раза (недостоверно).
- Природные изоляты продемонстрировали достаточно более выраженную адгезию при 24°С в сравнении с вагинальными штаммами, но равную адгезии оральных изолятов.
- Природные изоляты проявляют адгезивную способность к эпителию человека при 37°С, что позволяет говорить, что при определенных условиях они могут колонизировать экологические ниши человеческого организма.
Выводы
- Независимо от температуры оральные изоляты проявляют выраженную сайт-специфическую адгезию.
- Природные изоляты демонстрируют зависимость адгезивной способности от температурного режима: максимальный ИА при 24°С.
- При использовании в качестве контроля штаммов C.albicans ATCC необходимо учитывать, что на адгезивные свойства этих штаммов оказывает существенное влияние температурный режим (адгезия при 24°С в 2 раза выше, чем при 37°С).