На биопсийном материале матки шести первородящих женщин в возрасте от 20 до 31 года с дискоординацией родовой деятельности проводили количественное светооптическое изучение строения миометрия. Оценили тканевой состав, клеточный состав и число гладкомышечных клеток в поле зрения микроскопа. Показали, что основными компонентами миометрия являются гладкомышечные волокна, элементы соединительной ткани и микрососудистого русла. Гладкомышечные клетки демонстрировали разное сродство к толуидиновому синему и на основании этого они были условно поделены на светлые, темные и промежуточные клетки. Выявлена внутригрупповая вариация всех оцененных количественных параметров. Полученные данные сравнивали с теми же параметрами у рожениц с физиологической родовой деятельностью.
Имеющиеся в литературе немногочисленные светооптические описания миометрия матки животных и человека в родах выявили гетероморфность структуры гладкомышечных миоцитов этого органа [5, 6]. Ультраструктурные находки, сделанные у рожениц, подтвердили наличие светлых и темных миоцитов, различавшихся по степени развития в них синтетического и сократительного аппаратов [1, 4]. Вместе с тем, никто из исследователей не оценивал количественный состав тканевых компонентов миометрия матки рожениц при дискоординированной родовой деятельности, а также соотношение различных типов гладкомышечных клеток органа при данном осложнении родов [2, 8, 9]. Проведение корректных морфологических исследований необходимо для понимания механизмов регуляции сократительной деятельности матки при физиологических или при патологических родах [3, 5, 7]. Данная работа посвящена изучению морфологии матки с использованием корректных количественных светооптических методов анализа.
Материал и методы
Изучали биопсийный материал миометрия матки, полученный во время абдоминальных родов, выполненных по экстренным показаниям со стороны матери или плода у 6 рожениц с дискоординированной родовой деятельностью в родильном доме при ГКБ №29 и родильном доме №3 г. Москвы. Кесарево сечение выполняли в нижней трети тела матки через поперечный разрез по ее передней стенке. Роженицы в возрасте от 20 лет до 31 года (среднегрупповой возраст - 23±2 года) и при сроке беременности от 37 до 40 недель имели клинически диагностированную дискоординацию родовой деятельности матки. Характер патологической родовой деятельности был установлен в соответствие с критериями оценки [6]. С диагностической целью в области операционного разреза иссекали участок матки размером 0,5 х 1 х 1 см, поверхность эпиметрия маркировали ниткой, материал промывали 0,1 М фосфатным буфером (рН=7,4) и помещали в 4% раствор параформальдегида на том же буфере на несколько суток в холодильник (t=4С°). Фрагмент миометрия частично иссекали со стороны эндометрия по схеме, описанной в предыдущей работе [5]. При этом надрезы выполняли не на всю глубину куска, так что они не достигали поверхности эпиметрия, что позволяло проводить операционную биопсию одним блоком и улучшало условия фиксации, дегидратации и пропитки миометрия в эпоксидных смолах. Блоки дофиксировали 2 часа в 1% растворе четырехокиси осмия. Затем материал отмывали 30 минут от фиксатора в охлажденном 0,1 М фосфатном буфере (рН=7,4) и помещали на ночь в 70° этанол (t=4С°). Последующие процедуры дегидратации в спиртах возрастающей концентрации (80°, 96° и 100°) шли при комнатной температуре как в предыдущей публикации [5]. Затем материал последовательно помещали в окись пропилена, в окись пропилена и полную смесь аралдита и оставляли блоки на ночь в полной смеси аралдита [11]. Разрезали каждый блок на 6 пластин: 3 перпендикулярных длиннику куска с левой его стороны (пластины 1-3) и 3 продольных длиннику куска (пластины 4-6). Пластины помещали в смолу в нитроцеллюлозных центрифужных пробирках диаметром 1 см (Beckmann, USA) [5]. При этом первые 3 пластины ткани, плоскости которых были параллельны длинной оси матки и 3 оставшихся пластины ткани, чьи плоскости были перпендикулярны длинной оси матки укладывали на дно перпендикулярно длинной оси пробирок. Смолу полимеризовали 2 дня в термостате при 65С°. Получали для каждого случая 6 макроблоков смолы, в основаниях которых последовательно располагался весь материал биопсии. С данных блоков получали полутонкие срезы толщиной 1-2 мкм с использованием микротома Historange (ЛКБ, Швеция), окрашивали их толуидиновым синим как в наших предыдущих публикациях [1, 5]. Оценивали тканевой состав миометрия матки первородящих женщин с дискоординированной родовой деятельностью, его клеточный состав и количество гладкомышечных клеток в поле зрения микроскопа при световой микроскопии полутонких срезов с использованием окулярной морфометрической сетки. Для каждого случая просчитывали 10 полей зрения при объективе 16 и окуляре 10. Количество пересечений в квадратной тестовой системе составляло 281 точку на поле зрения. Все полученные параметры обрабатывали статистически и представляли в виде среднего арифметического и его ошибки (X¯±Sx).
Результаты исследования и их обсуждение
Оценивали содержание основных тканевых компонентов миометрия матки женщин в родах и показали, что объемная плотность гладкомышечных волокон, состоящих из гладкомышечных клеток (ГМК), колебалась в нем в среднем от 45,0±3,6% до 64,9±2,0%, соединительнотканных элементов - от 32,3±1,7% до 51,6±3,3% и элементов микрососудистого русла от 0,8±0,4% до 3,4±1,1% от общего объема ткани на случай. Оцененные параметры для каждой роженицы и среднегрупповые данные представлены в табл. 1.
Таблица 1
Тканевой состав миометрия матки первородящих женщин с дискоординацией родовой деятельности
(объемная плотность тканевых компонентов Vv X¯±Sx в %)
|
Роженица, Возраст (годы) |
Гладкомышечные клетки |
Соединительнотканные элементы |
Микрососуды |
|
Г-ва, (20) |
55,0±2,1 |
43,4±2,6 |
1,6±0,8 |
|
Т-ш, (20) |
45,0±3,6 |
51,6±3,3 |
3,4±1,1 |
|
Г-ва, (21) |
64,0±4,6 |
33,2±4,3 |
2,8±1,0 |
|
П-ва, (23) |
51,1±5,1 |
48,1±5,0 |
0,8±0,4 |
|
Е-ва, (23) |
64,9±2,0 |
32,3±1,7 |
2,8±1,3 |
|
К-к, (31) |
58,0±5,0 |
40,0±4,9 |
2,0±1,1 |
|
n=6, (23±2) |
56,3±3,1 |
41,5±3,0 |
2,2±0,4 |
Причем в целом полученные среднегрупповые показатели тканевого состава миометрия матки рожениц с дискоординацией родовой деятельности значимо не отличались от аналогичных данных у рожениц с физиологической родовой деятельности [5]. Данные результаты подтверждают, что независимо от типа родовой деятельности обязательными компонентами миометрия матки первородящих женщин являются гладкомышечные волокна, соединительнотканные элементы и микрососуды [1, 4, 7].
Для дальнейшей объективизации морфологических данных по структуре матки рожениц при дискоординированной родовой деятельности был оценен клеточный состав миометрия, поскольку ГМК хорошо поделились на 3 группы в зависимости от степени их сродства к толуидиновому синему [1]. Было показано, что у всех рожениц гладкомышечные волокна были построены из разного количества светлых, темных и промежуточных по своей окраске ГМК (табл. 2). Так количество светлых ГМК составляло от 7,3±2,3% до 32,0±8,7%, промежуточных - от 22,5±5,1% до 62,8±3,5% и темных ГМК- от 5,2±1,1% до 70,2±6,9% на случай.
Таблица 2
Клеточный состав матки первородящих женщин
с дискоординацией родовой деятельности (соотношение светлых,
темных и промежуточных гладкомышечных клеток X¯±Sx, в %)
|
Роженица, Возраст (годы) |
Светлые миоциты |
Промежуточные миоциты |
Темные миоциты |
|
Г-ва, (20) |
15,2±3,6 |
25,8±3,7 |
59,0±2,2 |
|
Т-ш, (20) |
7,3±2,3 |
22,5±5,1 |
70,2±6,9 |
|
Г-ва, (21) |
11,8±2,0 |
22,9±3,4 |
65,3±2,7 |
|
П-ва (23) |
13,2±5,1 |
51,0±9,2 |
35,8±9,2 |
|
Е-ва, (23) |
8,5±1,3 |
35,8±1,8 |
55,7±2,0 |
|
К-к, (31) |
32,0±8,7 |
62,8±3,5 |
5,2±1,1 |
|
N=6, (23±2) |
14,7±4,0 |
36,8±6,8 |
48,5±10,0 |
При сравнении средних показателей клеточного состава миометрия матки у рожениц с дискоординированной и физиологической родовой деятельностью (табл. 2) было выявлено, что в первой группе светлых миоцитов было в 2 раза больше, а темных - в 1,25 раза меньше, чем во второй группе женщин [5]. Количество же промежуточных миоцитов у этих групп рожениц было сравнимым. В среднем же по группе рожениц с дискоординацией родовой деятельности преобладающим типом клеток в миометрии матки, (в прочем, как и при физиологической родовой деятельности) были темные ГМК, которые встречались в 1,3 раза чаще, чем промежуточные миоциты и в 3,3 раза чаще, чем светлые ГМК (p<0,02). Предварительный качественный анализ светооптических препаратов миометрия матки первородящих женщин [1] показал, что имело место варьирование числа ГМК в поле зрения микроскопа, что могло быть связано как с различиями в тканевом составе, так и с различиями в размерах ГМК у разных рожениц. Количественный анализ светооптических препаратов миометрия матки рожениц с дискоординированной родовой деятельностью (табл. 3) подтвердил, что в разных случаях группы число ГМК варьировало от 88±7 до 152±15 на одно поле зрения.
Таблица 3
Количество гладкомышечных клеток (X¯±Sx ) матки первородящих женщин с дискоординацией родовой деятельности в поле зрения микроскопа
|
Роженица, Возраст (годы) |
Число полей зрения |
Среднее арифметическое |
Разброс |
|
Г-ва, (20) |
10 |
127±12 |
57-178 |
|
Т-ш, (20) |
10 |
88±7 |
50-121 |
|
Г-ва, (21) |
10 |
107±10 |
66-151 |
|
П-ва (23) |
10 |
130±5 |
84-208 |
|
Е-ва, (23) |
10 |
152±15 |
77-220 |
|
К-к, (31) |
10 |
109±7 |
71-139 |
|
n=6, (23±2) |
60 |
121±9 |
50-220 |
Необходимо подчеркнуть, что при дискоординации родовой деятельности среднее количество ГМК миометрия матки в поле зрения микроскопа было в 1,3 раза меньше (p<0,05), чем у рожениц с физиологической родовой деятельностью матки [1, 5].
Полученные результаты подтверждают наше предположение [5] о значении темных миоцитов в процессе длительного тонического сокращения матки в родах. Электронно-микроскопические исследования этого материала ранее выявили преобладание в темных миоцитах сократительных миофиламентов по сравнению со светлыми клетками [1].
Избыточное содержание у части женщин с дискоординацией родовой деятельности светлых и промежуточных миоцитов, а также недостаток темных клеток в миометрии матки по сравнению с роженицами с физиологической родовой деятельностью [5] позволяет предположить о недостаточно интенсивном синтезе у первых сократительных белков гладкомышечных клеток в прелиминарном периоде. Поскольку в процессе родового акта продолжается трансформация светлых миоцитов в промежуточные, а промежуточных в темные, то увеличение первого периода родов у таких рожениц за счет выжидательной тактики ведения, токолитической терапии при патологическом прелиминарном периоде или применении акушерского сна [6] в дальнейшем способствует усилению силы схватки и улучшает исход родов. Вместе с тем механизмы регуляции сократительной деятельности матки, в том числе при ее гипертонической дисфункции исследованы недостаточно [3, 7, 9, 10, 12]. Во многом это связано с тем, что мало изучен этиопатогенез аномалий родовой деятельности, среди которых самым загадочным продолжают оставаться дискоординированные маточные сокращения. Кроме исследования соотношения разных типов гладкомышечных миоцитов в матке для понимания ее функционирования, необходимо уделять внимание изучению соединительнотканной составляющей миометрия, значение которой все еще недооценивается акушерами [1, 5, 7], а также ее микроциркуляторному руслу [2, 5]. В последние годы во многих областях науки все большая роль отводится патологии соединительной ткани, а ряд заболеваний непосредственно связывают с ее изменениями. В то же время в рожающей матке, которая почти на половину состоит из соединительной ткани, ее ролью в акте сокращения и расслабления органа практически не интересуются. Надеемся, что дальнейшее изучение морфологии матки рожениц, особенно с использованием количественного анализа, позволит нам приблизиться к пониманию функционирования органа при нормальных и патологических родах и изменить подходы к профилактике и лечению аномалий родовой деятельности [6, 8].
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
- Братчикова Т.В., Павлович Е.Р., Подтетенев А.Д., Кугаевская Л.И. // «Актуальные вопросы акушерства и гинекологии», Москва, РГМУ МЗ РФ, 2004. - C. 118.
- Газазян М.Г. // Акушерство и гинекология. - 1989. - №9. - С. 67.
- Гаспарян Н.Д., Карева Е.Н. // Российский вестник акушера-гинеколога. - 2003. - №2. - C. 21.
- Красильникова А.Я., Персианинов Л.С., Железнов Б.И., Митин К.С. // Акушурство и гинекология. - 1971. - N.47. - №12. С. 22.
- Павлович Е.Р., Ботчей В.М., Подтетенев А.Д. // Успехи современного естествознания. - 2005. - №12. - С. 27.
- Подтетенев А.Д. Прогнозирование, профилактика и лечение слабости и дискоординации родовой деятельности. Автореферат диссертации дмн. - Москва. РУДН. - 2004. - 44 С.
- Савицкий Г.А., Савицкий А.Г. Биомеханика физиологической и патологической родовой схватки. - Санкт-Петербург: издательство «ЭЛБИ-СПб», 2003. - 287 С.
- Сидорова И.С., Оноприенко Н.В. Профилактика и лечение дискоординированной родовой деятельности. - Москва: Медицина, 1987. - 176 С.
- Сидорова И.С. // Вестник Российской ассоциации акушеров-гинекологов. - 1997. - №4. - С. 104.
- Циркин В.И., Дворянский С.А. Сократительная деятельность матки. (Механизмы регуляции). - Киров: КГМИ. РИСО ВГПИ, 1997. - 271 С.
- Червова И.А., Павлович Е.Р. // Гисто-гематические барьеры и нейро-гуморальная регуляция/ - Москва: Наука, 1981. - С. 221.
- Garfield R.E., Yallampalli Ch. // in book «Basic mechanisms controlling term and preterm birth», Eds. Chwalisz K., Garfield R.E., Berlin - New York: Springer-Verlag, 1993. - P. 1.