Материалы и методы.

Для анализа количества ядрышек периферической крови осуществляли подготовку препаратов с использованием стандартного полумикрометода культивирования лимфоцитов [Hungerford P.,1964].

Изучение ядрышек проводили на препаратах хромосом, окрашенных раствором азотнокислого серебра по методу Howell W.M. и Black D.A [1980] с некоторыми модификациями [Ляпунова Н.А., 1998].

На препаратах, приготовленных от каждого обследованного, было подсчитано количество ядрышек в 100 ядрах лимфобластов.

Результаты.

На основе количественного анализа ядрышек мы получили возможность выявления некоторых этнических особенностей. Полученные результаты представлены в таблице 1.

Таблица 1. Количество ядрышек в ядрах лимфоцитов периферической крови у народов Кемеровской области

^* достоверно отличается от русских жителей р < 0,0001

Из таблицы видно, что среднее число ядрышек в ядрах лимфоцитов периферической крови у телеутов, шорцев и калмаков меньше, чем у русских жителей Кемеровской области. Достоверно значимые отличия от русских жителей были отмечены в группах шорцев и калмаков (U_M-W=16,5 и 25,5). В целом, полученные данные могут свидетельствовать о существовании этнических особенностей пространственного расположения хромосом, несущих рибосомные гены.

Известно, что на пространственную организацию ядра могут влиять различные факторы, вызывающие повреждение структуры хромосом, например, радиация. В изученных группах ранее был проведен анализ частоты хромосомных аберраций [Дружинин В.Г., 2003] в лимфоцитах периферической крови (табл.2). Из таблицы видно, что самые высокие значения по уровню хромосомных нарушений были отмечены в группе шорцев - 5,80%. В тоже время, среднее число ядрышек на ядро у них самое низкое (1,68 на ядро), т.е. в данной этнической группе хромосомный мутагенез не оказывал значимого влияния на пространственную организацию ядра и формирование ядрышек. Это справедливо также и для группы калмаков.

Таблица 2. Частота аберрантных метафаз в изученных группах

 * достоверно выше по сравнению с другими группами р<0,05

Группы телеутов и русских доноров по частоте аберрантных метафаз достоверно друг от друга не отличаются. Эти же группы достоверно не различаются по количеству ядрышек в ядре.

На следующем этапе исследования всех обследованных доноров разделили на две группы в зависимости от индивидуальной частоты хромосомных аберраций (ХА). Исходя из того, что общепопуляционный уровень хромосомных мутаций в Кемеровской области составляет 2,86% [Дружинин В.Г., 2003] были сформированы группы доноров с индивидуальной частотой ХА менее 3% и 3% и выше. В связи с этим был проведен учет количества ядрышек в зависимости от частоты хромосомных аберраций у представителей разных этнографических групп Кемеровской области (табл.3).

Таблица 3. Количество ядрышек в зависимости от частоты хромосомных аберраций

* достоверно отличается от ХА>=3, Р<0,05

Было выявлено, что у телеутов среднее число ядрышек в ядрах лимфоцитов периферической крови при частоте ХА менее 3%, достоверно меньше, чем при частоте ХА более 3%. У русских жителей Кемеровской области такая закономерность не обнаружена.

Данный факт может свидетельствовать о том, что у телеутов ядрышковый показатель является специфическим маркером повышенной индивидуальной токсико-генетической чувствительности к факторам среды.

Кроме этого, во всех исследуемых группах был проведен анализ частоты встречаемости клеток с различным числом ядрышек (от 1 до 6). Было выявлено, что вне зависимости от национальности чаще всего встречались клетки с 1-3 ядрышками на ядро.

У шорцев и калмаков частота встречаемости клеток с большим количеством ядрышек (4 и более) заметно меньше, чем у представителей других этнических групп.

При сравнении всех распределений с помощью критерия χ² было показало существование достоверно значимых отличий (лишь распределения в группах телеутов и русских достоверно не отличались).

Таким образом, на основании полученных результатов можно сделать следующие выводы:

1. вне зависимости от национальной принадлежности во всех группах чаще всего встречались клетки с одним - тремя ядрышками в ядре;
2. в группах шорцев и калмаков отмечено достоверно меньшее количество ядрышек в лимфоцитах, чем в группах русских жителей Кузбасса и телеутов;
3. несмотря на высокие значения хромосомных мутаций у шорцев и калмаков пространственная организация ядра у них не претерпевает существенных изменений;
4. по среднему количеству ядрышек в лимфоцитах группа телеутов достоверно не отличается от группы русских жителей Кузбасса;
5. в группе телеутов выявлена следующая особенность: у индивидов с повышенными значениями частоты аберрантных метафаз наблюдались и более высокое число ядрышек в лимфоцитах.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Дружинин В.Г. Хромосомные нарушения у населения крупного промышленного региона: пространственно-временной цитогенетический мониторинг. - Автореферат докторской диссертации. М., 2003.
2. Ляпунова Н.А., Кравец-Мандрон И.А., Цветкова Т.Г. Цитогенетика ядрышкообразующих районов (ЯОР) хромосом человека: выделение четырех морфофункциональных вариантов ЯОР, их межиндивидуальное и межхромосомное распределение //Генетика. - 1998. - Т.34. - № 9. - С. 1298 - 1306.
3. Howell W.M., Black D.A. Controlled silver-staining of nucleolus organizer regions a protective colloidal developer: a one step method //Experienta. - 1980. - V. 36. - P. 1014-1015.
4. Hungerford D.A. Leucocytes cultured from small inocula of whole blood and preparation of methaphase chromosomes by treatment with hypotonic KCl //Stain. Technol. - 1964. - Vol. 40. - P. 333 - 338.