Цель нашего исследования состояла в разработке способов иммуно-цитологических исследований НАЛТ в клинических условиях и определении возможностей использования их для оценки состояния местной клеточной защиты верхних дыхательных путей в норме и при патологии.
Объем исследований. Для достижения поставленной цели нами были проведены комплексные иммуно-цитологические исследования НАЛТ, у 1850 детей в возрасте от 1месяца до 15 лет в течение 1995 - 2004 гг., результатом которых явилась разработка описанных ниже технологий. В общих цитограммах определялось относительное содержание эпителиоцитов (Эц), эозинофилов (Э), нейтрофилов (Н), лимфоцитов (ЛФ), плазмоцитов (Пц), макрофагов (МФ) и эпителиально-лейкоцитарное соотношение (Эц/ Лц). Лимфоцитограмма изучалась по содержанию бластных клеток (Бл. К), больших и малых лимфоцитов (БЛФ, СЛФ, МЛФ), интра- и экстрамакрофагальных лимфоцитов (ИМФЛ, ЭМФЛФ), а также по индексам генерации, митозов, деструкции лимфоцитов (ИГЛФ, ИМЛФ, ИДЛФ). Эпителиоцитограмму исследовали по величинам индексов деструкции, цитолиза, вакуолизации, метаплозии и микробной колонизаци эпителиоцитов (ИДЭц, ИЦЭц, ИВЭц, ИМЭц, ИМКЭц). Исследование лимфоцитограммы и эпителиоцитограммы отражало эпителиально - лимфоцитарную структуру миндалин [4].
Результаты исследований.
1. Способ иммуно- цитологического анализа НАЛТ.
Технология цитологического анализа НАЛТ усовершенствуется за счёт последующего выполнения ряда технических приёмов - определения общей клеточности биосреды, дифференцированного состава и соотношений основных клеточных элементов, качественных цитофизиологических показателей, заключительной оценки полученных данных.
Способ осуществляется следующим образом. Подготовительная часть технологии к проведению цитологического анализа НАЛТ состоит из получения материала с поверхности миндалин, приготовления цитологических препаратов, их фиксации (в смеси Никифорова 10 мин) и окрашивания по методу Романовского - Гимзе (20 - 30 минут), проведения исследования окрашенных препаратов НАЛТ при световой микроскопии (10 ´ 90) под иммерсией.
Собственная часть технологии цитологического анализа НАЛТ предусматривает последовательное выполнение ряда технических приёмов:
Определяют общее содержание клеток (ОСК) в биосреде в зависимости от интенсивности клеточной реакции (1 усл. ед. - до 25 клеток в п/з, 2 усл. ед . - 25 -50 клеток в п/з, 3 усл. ед . - 50 - 100 клеток в полях зрения и по преобладающему числу соответствующих оценок судят об общем содержании клеток (или величине цитолиза).
Определяют клеточный состав общей цитограммы и проводят дифференцированный подсчёт содержания популяций клеточных элементов в относительных показателях при исследовании 100 - 200 клеток. В общих цитограммах чаще всего определяют относительные показатели содержания Эц, Лц (Э, Н, ЛФ), Пц, МФ.
Вычисляют соотношение между основными популяциями клеток. Рассчитывают индекс эпителиально- лимфоцитарного соотношения (Эц/ ЛФ).
Исследуют парциальные цитограммы: лимфоцитограмму и эпителиоцитограмму. Парциальную лимфоцитограмму, исследуют по комплексу следующих показателей:
- по степени зрелости ЛФ в ряду основных их генераций (определение содержания макро-, мезо- и микрогенераций и / или Бл.К, БЛФ, СЛФ, МЛФ в %, расчёт ИГЛФ);
- по локализации ЛФ относительно клеток эпителиального покрова (определение содержания ИЭЛФ, ЭЭЛФ, расчёт ИЭЛФ/ ЭЭЛФ;
- путём идентификации основных популяций Лф (Т- ЛФ, В-ЛФ, О-ЛФ, Т-/В - ЛФ);
- по митотической активности или пролиферации Лф (расчёт ИМЛф);
- по степени повреждения (альтерации) ЛФ (расчёт ИДЛФ и СПДЛФ).
На основании полученных результатов цитологических исследований представляется возможным прижизненно оценить состояние процессов повреждения (альтерации), созревания (генерации), эпителиального транспорта, митоза (цитопродукции), дифференцировки популяций Лф.
Парциальную эпителиоцитограмму исследуют по комплексу следующих показателей:
- по степени повреждения Эц (расчёт ИДЭц, СПДЭц, ИЦЭц),
- по степени вауолизации Эц (расчёт ИВЭц),
- по степени метаплазии Эц (расчёт ИМЭц),
- по степени и интенсивности микробной колонизации (расчёт ИМКЭц, СПМКЭц).
Полученные результаты позволяют прижизненно оценить состояние процессов повреждения (альтерации), вакуолизации (вакуольной дистрофии), метаплазии, микробной колонизации Эц.
- Оценивают результаты исследований и формулируют заключение по цитологическому анализу.
Пример 1. У ребёнка В., 5 лет, страдающего бронхиальной астмой (БА), проведено цитологическое исследование НАЛТ. Результаты реализации способа цитологического анализа представлены ниже.
Цитограмма НАЛТ ребёнка В., 5 лет. Диагноз: БА, лёгкая форма, приступный период.
- Общее содержание клеток (ОСК) - 2,0 усл. ед.;
- Общая цитограмма: Эц 35% (снижено), Э 1 %, Н 3 % (повышено), Лф 55 % (повышено), Пц 3 % (повышено), Мф 3 %;
- Эц/ ЛФ = 0,64 (снижено);
- Парциальные цитограммы:
Цитограмма ЛФ: Бл.К 2 % (повышено), БЛФ 9 % (повышено), СЛФ 59%, МЛФ 30%, ИГЛФ 0, 11 (повышено), ИЭЛФ 25% (повышено), ЭЭЛФ 75% (снижено), ИЭЛФ / ЭЭЛФ 0,33 (повышено), Т- ЛФ 32 % (снижено), В- ЛФ 40 %, О- ЛФ 28 % (повышено), Т-/ ЛФ/В- Лф 0,80 (снижено), ИМЛФ 0,10 (повышено), ИДЛФ 0,15 (повышено), СПДЛФ 0,25 (повышено).
Цитограмма Эц: ИДЭц 0,80 (повышено), СПДЭц 1, 90 (повышено), ИВЭц 0,15 (повышено), ИМЭц 0,14 (повышено), ИМКЭц 0,65 (повышено), СПМКЭц 1, 45 (повышено).
Заключение: ОСК повышено, в общей цитограмме - снижение Эц, повышение Н, ЛФ Пц, Эц/ЛФ- дисбаланс; в парциальной цитограмме ЛФ - активация процессов генерации, митозов, эпителиально- лимфоцитарного транспорта, Т-ЛФ - дефицит, Т- ЛФ / В- ЛФ- дисбаланс, повышение процессов повреждения; в парциальной цитограмме Эц - усиление процессов повреждения, вакуолизации, метаплазии и микробной колонизации Эц.
Положительный эффект предлагаемого способа цитологического анализа НАЛТ состоит в следующем: отличается методической простотой и доступностью выполнения в ЛПУ любого типа и НИУ, высокой точностью и воспроизводимостью, характеризуется комплексным и системным подходом к исследованию НАЛТ, предусматривает унификацию и стандартизацию способа, способствует объективизации и количественной оценке полученных качественных показателей, повышает диагностические возможности способа и качество диагностики нарушений НАЛТ - системы. Точность способа - 95 %, воспроизводимость - 90 %.
2. Cпособ определения эпителиально - лимфоцитарного соотношения в цитограмме.
Определение эпителиально-лимфоцитарного соотношения проводится на основании результатов цитологического исследования Эц и ЛФ в НАЛТ и количественного выражения их соотношения соответствующим индексом соотношения Эц и ЛФ (Эц/ ЛФ).
Соотношение Эц и ЛФ (Эц /ЛФ) позволяет определять структурно-функциональные взаимоотношения эпителиального покрова и лимфоидной ткани. В лимфоидных органах (миндалинах и др.) происходит активная миграция ЛФ в эпителиальный покров, образуя на его поверхности клеточный (эпителиально- лимфоцитарный) комплекс защиты. В результате значительного содержания ЛФ в эпителиальном покрове НАЛТ образуется своеобразный эпителиально-лимфоцитарный пласт, который рассматривается эпителиально-лимфоцитарным симбиозом. Инфильтрация эпителиального покрова лимфоцитами в НАЛТ происходит в связи с антигенным действием попадающих на их поверхность чужеродных веществ, микроорганизмов или продуктов их жизнедеятельности. Движение ЛФ направлено в сторону микробного, антигенного воздействия. ЛФ, мигрировавшие в эпителиальный покров, вступают в контакт с антигенами, а затем возвращаются в лимфоидную ткань и выполняют иммунологическую функцию. Следовательно, миграция лимфоцитов является ответом на антигенное воздействие [4 ].
Способ осуществляется следующим образом. В зависимости от характера объекта из исследуемой биосреды получают материал, готовят цитологические препараты по общепринятым правилам, фиксируют в смеси Никифорова 10 мин, окрашивают по методу Романовского - Гимзе 20 - 30 мин и проводят световую микроскопию (10 ´ 90) под иммерсией. Затем осуществляется цитологический анализ с подсчётом цитограммы на 100 клеток (в %). Состояние структурно-функциональной межклеточной системы «Эц - ЛФ» оценивают величиной Эц / ЛФ, которая определяется частным от деления относительного числа Эц и ЛФ, подсчитанных в общей цитограмме (в %) НАЛТ. ЭЦ / ЛФ = Эц(%) : Лф (%). Средние значения Эц, Лф у здоровых детей колеблются в пределах 1,0 - 2,5 (в среднем 0,5 - 2,0). Отклонения индексов соотношения Эц / ЛФ от нормы свидетельствуют о нарушениях эпителиально-лимфоцитарных взаимоотношений и о развитии эпителиально-лимфоцитарного дисбаланса в НАЛТ - системе. Повышение средних величин Эц/ ЛФ свидетельствует о повышении пролиферативной активности клеток эпителия, а их снижение - об активации процессов миграции Лф на поверхности эпителиального покрова.
Пример 1. У ребёнка С., 12 лет, страдающего респираторным аллергозом, в периоде рецидива заболевания было проведено цитологическое исследование НАЛТ - системы. При цитологическом анализе была получена следующая цитограмма: Эц 55 % (снижено),Э 1 %, Н 2 %, ЛФ 34 % (повышено), Пц 3 % (повышено), Мф 5 %; Эц / ЛФ- 1,62. Заключение: величина Эц /ЛФ резко снижена (в 1,5 раза по сравнению с нормой), что свидетельствует об активации лимфоидного звена НАЛТ (усиление миграции ЛФ в клетки эпителиального покрова) у обследованного больного.
3. Способ идентификации популяций лимфоцитов в цитограмме.
Идентификация популяций ЛФ (Т-, В-, О- ЛФ) в биосистемах осуществляют с помощью цитохимического метода, ранее предложенного Л. А. Ивановой, Е. В. Васильевой, В. В. Соколовым (1979) для исследования популяций Лф в периферической крови, путём выявления активности кислой фосфатазы (КФ). По характеру распределения химического продукта в клетках косвенно судят об их принадлежности к той или иной популяции [2].
Сущность способа заключается в следующем. Вначале получают материал различных локусов для цитологического исследования и готовят цитологические препараты на предметных стёклах. В последующем в препаратах НАЛТ проводят цитохимическую реакцию на определение активности КФ в ЛФ методом азосочетания по Р.П. Нарцисову (1970) с использованием нафтол- AS - Bi - фосфата в качестве субстрата и азотированного парарозанилина в качестве красителя. Цитохимическая реакция протекает 2 часа [3].
При окраске цитологических препаратов на КФ выделяют три типа реакции в ЛФ:
- единичные (1-4, реже больше) яркие, чётко очерченные; крупные или средних размеров гранулы (Т - ЛФ);
- множественные мелкие, нечёткие очерченные гранулы, часто на фоне диффузного окрашивания (О - ЛФ)
- отсутствие продукта реакции на КФ, ферментоотрицательные клетки (В - ЛФ).
Содержание КФ определяют в 100 клеточных элементах и подсчитывают дифференцированное число ЛФ с разным характером цитохимической реакции: Т - ЛФ, В - ЛФ, О - ЛФ и соотношение Т - ЛФ/ В- ЛФ.
Пример 1. У больного ребёнка Т., 5 лет, из группы риска по развитию БА были проведены исследования цитологических препаратов НАЛТ с целью идентификации популяций Лф. Цитологические препараты были окрашены по методу азосочетания для выявления активности КФ в ЛФ. При цитологическом анализе установлено следующее: Т -ЛФ 42 %, В - ЛФ 42 %, О - Лф 16 %, Т - ЛФ/ В- ЛФ-1,0. Заключение: содержание популяций Лф и их соотношение соответствует норме.
Пример 2. У ребёнка С., 10 лет, страдающего тяжёлой формой БА, при исследовании НАЛТ была проведена идентификация популяций Лф. При этом было установлено следующее: Т - ЛФ 29 %, В - ЛФ 42 %, О - ЛФ 21 %, Т-ЛФ/ В-ЛФ 0,58. Заключение : нарушение Т - клеточного звена иммунитета (снижение числа Т - ЛФ) и дисбаланс основных популяций (Т - ЛФ рабочего времени на выполнение данной технологии в 3-4 раза, доступность выполнения в широкой сети ЛПУ, не требуется специальной иммунологической лаборатории и подготовленных специалистов, значительное упрощение технологии идентификации ЛФ значительное сокращение затрат дорогостоящих материально - технических средств, расширение диагностических возможностей и возможностей выявления дефектов клеточных звеньев иммунитета, повышение качества лечебно-диагностической помощи пациентам с нарушениями систем местной защиты.
4. Способ оценки степени генерации лимфоцитов в цитограмме.
Оценка степени генерации (созревания) ЛФ проводится на основании результатов цитологического исследования биосред НАЛТ путём подсчёта различных генераций ЛФ (Бл, К, БЛФ СЛФ, МЛФ) в % и вычисления соответствующего индекса генерации ЛФ (ИГЛФ) и его оценки.
Способ осуществляется следующим образом. Получают материал для исследования, готовят цитологические препараты по общепринятым правилам, фиксируют их в смеси Никифорова (0 мин) и окрашивают методом Романовского- Гимзе (20 -30 мин), проводят исследование цитологических препаратов при помощи световой микроскопии (10 ´ 90) под иммерсией. В процессе цитологического анализа подсчитывают 100 ЛФ разных генераций. Сущность технологии заключается в дифференцированном подсчёте генераций ЛФ (ИГЛФ). В лимфоцитограмме по степени зрелости клеточных элементов выделяют бластные клетки (Бл.К), большие, средние и малые ЛФ(БЛФ, СЛФ, МЛФ). В этом случае Бл.К и БЛФ отождествляют с макрогенерациями ЛФ, СЛФ - с мезогенерациями и МЛФ - с микрогенерациями ЛФ. Бл.К соответствуют полибластам с полипотентной ориентацией дифференцировки, БЛФ - лимфобластам, СЛФ - пролимфоцитам и МЛФ- зрелым Лф. Для расчёта ИГЛФ используют следующую формулу: (Бл. К + БЛФ): (СЛФ + МЛФ), в которой числитель представлен суммой малодифференцированных клеточных элементов (БЛ.К + БЛФ), а знаменатель - суммой зрелых форм ЛФ (СЛФ + МЛФ). Величины ИГЛФ в норме могут колебаться от 0,05 до 0,15 (в среднем 0,10). Увеличение ИГЛФ свидетельствует о сдвиге в сторону созревающих (малодифференцированных) клеток (Бл.К, БЛФ), а снижение ИГЛФ указывает на преобладание зрелых форм ЛФ (СЛФ, МЛФ). Следовательно, значения ИГЛФ указывает на преобладание зрелых форм ЛФ: чем выше величины ИГЛФ - тем меньше степень зрелости ЛФ. ИГЛФ позволяет судить о характере и интенсивности процессов генерации клеточных элементов.
Пример 1. У ребёнка Т., 12 лет, перенёсшего острую пневмонию, в периоде реконвалесценции провели цитологическое исследование НАЛТ. При проведении цитологического анализа было установлено следующее: Бл.К. - 1%, БЛФ- 9%, СЛФ- 50%, МЛФ- 40 %, ИГЛФ = 0,11 (норма 0,05). Заключение: изменения в лимфоцитограмме связаны с увеличением содержания малодифференцированных клеток (Бл. К., БЛФ, СЛФ) и уменьшением количества зрелых ЛФ - МЛФ, повышением значений ИГЛФ в 2,0 раза. Полученные данные указывают на активацию процессов генерации ЛФ в НАЛТ.
Положительный эффект предлагаемого способа оценки степени генерации ЛФ в цитологических препаратах состоит в следующем: методическая простота и доступность выполнения в ЛПУ всех типов, атравматичность и безопасность для обследованных больных, высокая точность и информативность способа, возможность количественной и интегральной оценки процессов созревания ЛФ, расширение диагностических возможностей цитологических исследований и повышение качества лечебно-диагностического процесса и цитологических исследований. Точность способа - 92 % и воспроизводимость способа - 90.
5. Способ оценки репродукции клеток (цитопродукции) в цитограмме.
Оценка репродуктивной функции клеток проводится на основании результатов цитологического исследования биосред путём подсчёта числа клеток, содержащих картины митозов в %, вычисления индекса митоза клеток (ИМК) и их оценки.
Репродуктивная функция клеток в цитологии исследуется по митотической их активности. Митоз, как наиболее распространённый способ репродукции клеток обеспечивает возможность образования генетически равноценных клеток и сохраняет преемственность хромосом в ряду клеточных генераций. Это достигается сочетанием процессов идентичной редупликации хромосом и их равномерным распределением между дочерними клетками. При цитологическом исследовании определяют процесс митоза в клетке на разных его стадиях. Чаще всего выделяют 4 стадии собственного процесса митоза:
- профазу - стадию формирования хромосом и расхождения центриолей,
- метафазу - стадию перемещения хромосом и экваториальной плоскости делящейся клетки и формирования « материнской звезды»,
- анафазу - стадию расхождения хромосом к полюсам, формирования 2-х групп хромосом и образования фигуры « дочерних звёзд»,
- телефазу - заключительная стадия митоза, стадия реконструкции (формирования) дочерних ядер из групп хромосом и разделения тела на 2 части.
В период интерфазы (между процессами митозов) определяются процессы дифференцировки, роста и функционирования клеток, а стадии митозов не определяются [4 ].
Способ осуществляется следующим образом. Вначале получают материал для исследования, готовят цитологические препараты по общепринятым правилам, фиксируют их в смеси Никифорова (10 мин) и окрашивают методом Романовского - Гимзе (20 -30 мин), проводят исследование цитологических препаратов при световой микроскопии (10 ´ 90) под иммерсией. Количественная оценка цитопродукции осуществляется по степени митотической активности клеток. Для этого используется индекс митозов клеток (ИМК), который вычисляют по следующей формуле:
n митоз
ИМК = ------------------ .
n митоз + n0
При расчёте ИМК определяют число клеток с фигурами митоза (n митоз) и количество клеточных элементов, не содержащих фигур митоза (n0). Теоретически величины ИМК могут колебаться в пределах 0,01 - 0,05. Величина ИМК находится в прямой зависимости от миотической активности клеток. Высокие значения ИМК указывают на повышение миотической активности ЛФ и активацию процессов пролиферации лимфоидной ткани.
Пример 1. В результате окончания лечения ребёнка Т., 10 лет,больного БА, было проведено цитологическое исследование НАЛТ. При этом было установлено следующее. Число ЛФ с фигурами митозов - 8 % (n митоз), число Лф без картин митозов (интерфаза) - 92 % (n0) . ИМЛФ = 8: (8 + 92) = 0,08. Заключение: в результате проведенного лечения в НАЛТ - системе определяется усиленная (в 2-3 раза) цитопродукция лимфоидной ткани.
Положительный эффект предлагаемого способа оценки репродуктивной функции клеток в цитологических препаратах различных биосистем состоит в следующем: методическая простота и доступность выполнения в ЛПУ любого типа, атравматичность и безопасность для обследования больных, высокая токсичность и информативность способа, возможность количественной и интегральной оценки процессов цитопродукции, расширение диагностических возможностей цитологических исследований и повышение информативной их ценности, объективизация полученных данных, возможность сравнения результатов исследования, повышение качества лечебно-диагностического процесса и цитологических исследований. Точность способа составляет 90 %, воспроизводимость способа - 98 %.
5. Способ оценки взаимодействия эпителиальных М- клеток и лимфоцитов в цитограмме.
Оценка взаимодействия эпителиальных М-клеток и ЛФ проводится на основании результатов цитологического исследования биосред путём подсчёта количества эпителиальных М- клеток, соответствующего числа интра - и экстраэпителиальных ЛФ (ИЭЛФ, ЭЭЛФ) в % и вычисления соотношения ИЭЛФ/ ЭЭЛФ и его оценки.
Взаимодействие эпителиальных М-клеток и ЛФ определяется на основании оценки образования эпителиальных М-клеток и интраэпителиальной локализации ЛФ в структурах лимфоидной ткани. Мукозальный эпителий является псевдомногослойным или однослойным, его клетки очень плотно соединены между собой. В слизистой оболочке существует 3 типа клеток, взаимодействующих с антигеном: альвеолярные макрофаги (АМ), дендритные клетки и микроворсинчатые эпителиальные клетки или М-клетки находятся в эпителии над лимфоидной тканью [7,8].
Эпителиальные М- клетки транспортируют антиген с поверхности слизистой оболочки в подлежащую лимфоидную ткань. М- клетки не обрабатывают антиген (лизосомальная система не принимается во внимание) и не представляют его. М- клетки захватывают ЛФ путём эндоцитоза (эндоцитобиоза), изолируют их от экзо- и эндогенных влияний в различных слоях слизистой оболочки. Следует полагать, что именно клетки эпителия (М-клетки) служат локусом взаимодействия антигенного материала и лимфоидных клеток. Эпителиальные М-клетки заключают в себе ЛФ, которые инфильтрируют эпителиальный покров (интраэпителиальные ЛФ - ИЭЛФ). В конечном итоге эпителиальные М-клетки и ИЭЛФ составляют структурно-функциональную основу местной защитно-транспортной системы клеток в лимфоидной ткани [7,8].
Способ осуществляется следующим образом. Вначале получают биологический материал для цитологического исследования, готовят цитологические препараты, фиксируют их в смеси Никифорова (10 мин) и окрашивают методом Романовского - Гимзе (20 - 30 мин), проводят световую микроскопию под иммерсией. Собственная часть технологии цитологического анализа включает определение числа интраэпителиальных и экстраэпителиальных ЛФ (ИЭЛФ и ЭЭЛФ) и расчёт индекса соотношения ЛФ интраэпителиальной и экстраэпителиальной локализации (ИЭЛФ/ЭЭЛФ). Средняя величина ИЭЛФ/ ЭЭЛФ в норме у детей чаще составляет 0,15 - 0,30. Величины содержания ИЭЛФ (12,8 - 22,5 %) и значения ИЭЛФ. ЭЭЛФ находятся в прямой зависимости от степени активности процессов кооперации клеточных элементов (Эц - ЛФ).
Пример 1. У ребёнка К., 5 лет, в разгар ОРЗ было проведено цитологическое исследование НАЛТ - системы. При этом было установлено следующее. ИЭЛФ - 16 % (повышено), ЭЭЛФ - 84% (понижено), ИЭЛФ/ ЭЭЛФ = 0,19. Заключение: в НАЛТ - системе была выявлена активация процессов кооперации эпителиальных М-клеток и ЛФ с повышением количества ИЭЛФ и величины ИЭЛФ/ ЭЭЛФ.
Положительный эффект предлагаемого способа оценки взаимодействия эпителиальных М- клеток и ЛФ в цитологических препаратах различных биосистем состоит в следующем : высокая токсичность и информативность способа, методическая простота и доступность выполнения в ЛПУ любого типа, атравматичность и безопасность для обследованных пациентов, возможность количественной и интегральной оценки процессов кооперации эпителиальных М-клеток и ЛФ, расширение диагностических возможностей цитологических исследований и повышение информативной их ценности, объективизация полученных данных, возможность сопоставления результатов исследования и их сравнения, повышение качества цитологической диагностики в лечебно-диагностическом процессе ЛПУ. Точность способа достигает 92%, воспроизводимость способа - 96%.
6. Способ оценки взаимодействия макрофагов и лимфоцитов в цитограмме.
Оценка взаимодействия МФ и ЛФ проводится на основании результатов цитологического исследования биосред путём подсчёта количества МФ и соответсвующего числа интрамакрофагальных (ИМФЛФ) и экстрамакрофагальных (ЭМФЛФ) ЛФ в % и вычисления соотношения ИМФЛФ/ ЭМФЛФ и его оценки.
Способ осуществляется следующим образом. Вначале получают материал для цитологического исследования, готовят цитологические препараты, фиксируют их в смеси Никифорова (10 мин) и окрашивают методом Романовского- Гимзе (20 -30 мин), проводят световую микроскопию (10 ´ 90) под иммерсией. Затем определяют число интра- и экстрамакрофагальных ЛФ(ИМФЛФ и ЭМФЛФ) в % и рассчитывают индекс соотношения ЛФ интра- и экстрамакрофагальной локализации (ИМФЛФ/ ЭМФЛФ). Проводится подсчёт на 100 ЛФ равной локализации. Средняя величина ИМФЛФ/ ЭМФЛФ в норме у детей чаще составляет 0 - 0,05. Величины содержания ИМФЛФ/ ЭМФЛФ находятся в прямой зависимости от активности системы кооперации клеточных элементов (МФ - ЛФ).
Пример 1. Цитологическое исследование НАЛТ было проведено у ребёнка Т., 14 лет, с диагнозом: рецидивирующий обструктивный бронхит, межрецидивный период. При цитологическом исследовании было получено следующее: ИМФЛФ - 8%, ЭМФЛФ- 92 %, ИМФЛФ/ ЭМФЛФ - 0,09. Заключение: в системе НАЛТ была выявлена активация процессов кооперации АМ и ЛФ с повышением количества ИМФЛФ и величины ИМФЛФ/ ЭМФЛФ.
Преимущества и положительные эффекты предлагаемого способа оценки взаимодействия МФ и ЛФ в цитологических препаратах различных биосистем заключается в следующем: высокая токсичность чувствительность и информативность способа, методическая простота и доступность выполнения в ЛПУ любого типа, атравматичность и безопасность для обследования пациентов, возможность количественной и интегральной оценки процессов кооперации МФ и ЛФ, расширение диагностических возможностей, цитологических исследований и повышение информативной их ценности. Объективизация полученных данных, возможность сопоставления результатов исследования и их сравнения, повышение качества цитологической диагностики в лечебно - диагностическом процессе ЛПУ. Точность способа достигает 90 %, воспроизводимость способа - 95 %.
Таким образом, проведённые исследования позволили разработать комплекс иммуно-цитологических способов оценки структурно- функционального состояния НАЛТ в норме и при патологии. Показанные преимущества способов перед аналогами позволяют рекомендовать их к применению в лабораторной и клинической практике, в научно - исследовательской деятельности.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
- Завгородняя Е.Г., Ловпаче З.Н. Эффективность метода прижизненной оценки функционального состояния нёбных миндалин человека //Вестник оториноларингологии. - 1990. - № 3. - С. 27 - 29
- Иванова Л.А., Васильева Е.В., Соколов В.В. Идентификация В-, Т-, и « нулевых» лимфоцитов окраской на кислую фосфатазу //Лабораторное дело. - 1979. - № 10. - С. 593 - 596.
- Нарциссов Р.П. Цитохимия ферментов лейкоцитов в педиатрии: Дисс....докт .мед. наук. - М., 1970. - 360 с.
- Осин А.Я. Местные факторы защиты в патогенезе и первичной профилактике бронхиальной астмы у детей: Автореф. Дисс....докт. мед. наук. - Томск, 2000. - 46 с .
- Пчельников Ю.В., Шабашов К.С. Популяции и субпопуляции лимфоцитов в миндалинах //Журнал ушных, носовых и горловых болезней. - 1982. - № 4. - С. 5 - 9.
- Сапин М.Р., Этингер Л.Е. Иммунная система человека. - М.: Медицина, 1996. - 304 с.
- Lefracois L. Basic aspects in intraepithelial lymphocyte immunobiology //In Handbook of Mucosal Immunology / eds by Ogra et al. - New York : Academic Press, 1994 . - P. 287 - 297.
- Sminia T. A review of mucosal immune system : development structure and function of the upper and lover respiratory tract. - Europ. Respiration Revue. - 1995. - Vol. 6. - № 35. - Р. 136 -141.