Цель исследования - оценить влияние клинических и природных изолятов грибов рода Candida на внеклеточный киллинг и фагоцитарную активность нейтрофилов, моноцитов и эозинофилов здоровых лиц.
Материал и методы исследования
Клинические изоляты грибов Candida spp., выделенные от женщин с различной генитальной патологией, были представлены видами: Candida albicans (24 культуры), Candida glabrata (4), Candida krusei (2). Природные штаммы, выделенные с объектов окружающей среды, были предоставлены кафедрой биологии почв факультета почвоведения МГУ: Candida guillermondii (5), Candida tropicalis (3), Candida maltosa (1), Rhodotorula rubra (1). Объектом исследования служили фагоцитарные клетки, выделенные из венозной крови клинически здоровых доноров. Полученные фагоциты инкубировали с каждой культурой грибов при двух временных режимах (15 и 60 минут).
Фагоцитарную активность оценивали соответственно для нейтрофилов, моноцитов и эозинофилов по следующим показателям: процент фагоцитоза - процент клеток, участвующих в фагоцитозе; индекс адгезии - количество адгезированных Candida spp. к одному истинному фагоциту; индекс поглощения - количество поглощенных Candida spp. одним истинным фагоцитом.
Внеклеточный киллинг Candida spp. оценивали по выживаемости уклонившихся от фагоцитоза грибов, делая посевы из каждой пробы на плотный агар Сабуро.
Результаты исследования.
Процент фагоцитоза. В отношении вагинальных изолятов процент фагоцитирующих клеток достигал через 15 минут около 50%, увеличиваясь в 1,5 раза к 60 минуте. А в отношении природных изолятов процент фагоцитоза на 15 минуте наблюдения составлял около 30%, практически не меняясь во времени. После рассмотрения суммарного вовлечения лейкоцитов в фагоцитоз, была оценена активность каждой фагоцитарной клетки, включенной в этот процесс. Для этого рассмотрели феномен адгезии и феномен поглощения грибов Candida spp.
Феномен адгезии. Фагоциты здоровых лиц на 15 минуте контакта демонстрировали практически равнозначные индексы адгезии к Candida spp. не зависимо от вида лейкоцитов и источника изоляции грибов. Однако на 60 минуте наблюдались различия: индексы адгезии фагоцитов к клиническим изолятам нарастали. Тогда как, к природным изолятам индексы адгезии нейтрофилов и моноцитов снижались, и стали достоверно ниже показателей адгезии к клиническим штаммам.
Феномен поглощения. Индексы поглощения клинических изолятов Candida spp. в ранний срок наблюдения были почти в 1,5 - 2 раза выше, чем природных, и практически не менялись во времени. Однако индексы поглощения природных изолятов нейтрофилами и моноцитами возрастали к 60 минуте контакта и сравнивались с индексам поглощения клинических изолятов.
Внеклеточный киллинг грибов рода Candida. Проведенные исследования показали, что выживаемость уклонившихся от фагоцитоза клинических изолятов Candida spp. во внеклеточной среде, содержащей продукты дегрануляции и секреции фагоцитов, была в 3 раза выше по сравнению с природными штаммами на всех сроках наблюдения.
Заключение
Клетки, способные к фагоцитозу и внеклеточному киллингу, являются важным элементом врожденной защиты от кандидозной инфекции. Но эффективность защиты определяется рядом условий, в том числе видовыми и штаммовыми особенностями грибов рода Candida, количеством и ассортиментом фагоцитарных клеток и их активностью, адаптивным характером локального окружения места действия. Фагоцитарная активность лейкоцитов и показатели выживаемости грибов в «коктейле» экстраклеточных продуктов фагоцитов более выражены в отношении клинических изолятов Candida spp., чем природных.