Научный журнал
Успехи современного естествознания
ISSN 1681-7494
"Перечень" ВАК
ИФ РИНЦ = 0,791

ИСПОЛЬЗОВАНИЕ СТАНДАРТНОГО МЕТОДА ОПРЕДЕЛЕНИЯ ОБЩЕГО БЕЛКА ПРИ ИССЛЕДОВАНИИ СЫВОРОТКИ КРОВИ ЖИВОТНЫХ

Малинин М.Л.

При исследовании большого количества проб крови от животных актуальной остается проблема использования методов, позволяющих ускорить и удешевить скрининговые лабораторные исследования.

В медико-биологической практике биохимических лабораторных исследований давно и широко используется стандартный метод определения концентрации белка в моче путем преципитации сульфосалициловой кислотой. Впервые исследовал возможность обнаружения белка путем осаждения его кислотой Брайт еще в далеком 1827 году. Метод вполне сформировался к 1926 году (Folin at al., 1914; Kingsbury at al., 1926). Он был адаптирован нами для определения концентрации общего белка в сыворотке и плазме крови животных.

Принцип метода заключается в оценке ослабления светового потока, возникающего при образовании суспензии вследствие добавления к белоксодержащей пробе раствора сульфосалициловой кислоты (турбодиметрический анализ). Степень помутнения пропорциональна концентрации общего белка. К достоинствам методики следует отнести несложную пробоподготовку, использование лишь одного недорогого реактива с большим сроком годности, незначительное время протекания реакции, возможность приготовления реагента в полевых условиях и использования любого фотометра. Заслуживает внимания тот факт, что результаты определения белка не зависят ни от хранения сыворотки крови в течение недели при комнатной температуре, ни даже от прогревания образцов в течение 30 минут при 56 °С [1,3].

В плазме крови человека и животных содержание общего белка традиционно определяют колориметрическими методами (биуретовым, методом Лоури и др.).

Использование биуретового реактива (Doumas аt al., 1981) обеспечивает высокую чувствительность, однако линейность биуретовой реакции зависит от концентрации ионов Cu2+. При низком содержании ионов двухвалентной меди в среде значительная ошибка наблюдается при определении низких концентраций белка. При высоком содержании ионов Cu2+ необходимо увеличивать pH для их стабилизации, но при значительном увеличении pH проба мутнеет и становится непригодной для анализа уже через 30 мин. Изменение окраски раствора при использовании биуретового реактива пропорционально не столько концентрации белка как таковой, сколько количеству пептидных связей. Метод может давать завышенные результаты в присутствии олигопептидов, которые однотипно с белками реагируют с биуретом. Известно, что при некоторых патологических состояниях, например, при миеломной болезни, количество олигопептидов в плазме крови может значительно повышаться. В этих случаях необходимо использование метода, позволяющего получить более точный результат.

Метод Лоури [2,4] обладает высокой чувствительностью (10-60 мг/л), но интенсивность окраски пропорциональна не концентрации общего белка, а количеству тирозина и триптофана. Содержание этих аминокислот в различных белках различно. Так, в альбуминах и γ-глобулинах оно различается более чем на 20% (Peterson, 1979). Поэтому метод Лоури широкого применения в медико-биологической практике не нашел, хотя при определении концентрации индивидуальных белков он - один из лучших. К недостаткам методики можно отнести и необходимость использования двух недешевых реактивов, каждый из которых имеет весьма небольшой срок годности.

Нами было апробировано использование метода осаждения белков сульфосалициловой кислотой для определения концентрации общего белка в стандартных растворах бычьего сывороточного альбумина, содержащих двукратные разведения до концентраций менее 1 г/л. Параллельно в этих же пробах концентрация общего белка определялась с помощью биуретового реактива. Показано, что в диапазоне 10-100 г/л результаты, полученные обоими методами, сколько-нибудь существенно не различались, а в диапазоне менее 10 г/л метод с использованием сульфосалициловой кислоты оказался более точным. Затем обе методики были использованы нами для определения концентраций белка в плазме крови различных лабораторных животных (65 белых крыс, 40 морских свинок и 30 кроликов). Установлено, что адаптированный метод определения концентрации общего белка путем осаждения сульфосалициловой кислотой позволяет быстрее и в ряде случаев более точно установить степень гипер- или же гипопротеинемии у того или иного животного.

Полученные результаты позволяют рекомендовать применение метода преципитации сульфосалициловой кислотой при скриниговых исследованиях большого количества проб на общий белок, например, на свиноводческих фермах, птицефабриках, в полевых условиях при изучении представителей дикой фауны.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ:

  1. Hill B.N., Laessig R.H., Koch D.D. et al. Comparison of plastic versus glass evacuated serum-separator (SST) blood-drawing tubes for common clinical chemistry determinations // Clin. Chem. 1992. Vol. 38. P. 1474-1478.
  2. Lowry O.H., Rosebrough N.J., Farr A.L., Randall R.J. Protein measurement with the Folin reagent // J. Biol. Chem. 1951. Vol. 193. P. 265-275.
  3. Peters T. Jr., Biamonte G.T., Doumas B.T. Protein (total protein) in serum, urine, and cerebrospinal fluid; albumin in serum. In: Faulkner W.R., Meites S., Eds. Selected methods of clinical chemistry. Washington DC. 1982, AACC, Vol. 9. P. 317-325.
  4. Peterson GL. Review of the Folin phenol protein quantitation method of Lowry, Rosebrough, Fair and Randall // Anal. Biochem. 1979. Vol. 100. P. 201-220

Библиографическая ссылка

Малинин М.Л. ИСПОЛЬЗОВАНИЕ СТАНДАРТНОГО МЕТОДА ОПРЕДЕЛЕНИЯ ОБЩЕГО БЕЛКА ПРИ ИССЛЕДОВАНИИ СЫВОРОТКИ КРОВИ ЖИВОТНЫХ // Успехи современного естествознания. – 2008. – № 3. – С. 105-106;
URL: https://natural-sciences.ru/ru/article/view?id=9621 (дата обращения: 02.07.2022).

Предлагаем вашему вниманию журналы, издающиеся в издательстве «Академия Естествознания»
(Высокий импакт-фактор РИНЦ, тематика журналов охватывает все научные направления)

«Фундаментальные исследования» список ВАК ИФ РИНЦ = 1.074