В настоящее время компоненты тканевой фибринолитической системы рассматриваются как важнейшие агенты, способные обеспечить прогрессивный рост опухоли, миграцию клеток и образование новых сосудов [3].
Несколько клинических исследований свидетельствуют о том, что высокий уровень активатора плазминогена урокиназного типа (u-PA) и его рецептора (u-PAR) в опухолевой ткани связан с плохим прогнозом и высокой частотой рецидивов у всех женщин с РМЖ и РЭ, а особенно у тех, кто находится в периоде постменопаузы [10]. В некоторых экспериментах, проведенных на различных линиях клеток, было замечено, что u-PA обладает митогенной активностью [8].
Поскольку молочная железа и матка являются гормонозависимыми органами, считается, что различные половые гормоны могут влиять на риск возникновения в них злокачественных новообразований, воздействуя на метаболические системы, участвующие в канцерогенезе. Так, было показано, что прогестерон значительно снижает экспрессию гена u-PA в клетках аденокарциномы молочной железы MDA-MB-231, имеющих рецепторы к нему, и ингибирует рост опухоли in vivo [7]. Относительно действия эстрогена на продукцию u-PA нет однозначных данных. A.S. Levenson и соавторы [6] показали, что эстрадиол пропорционально своей концентрации снижает уровень мРНК u-PA, t-PA и их ингибитора (PAI-1), а также их секрецию в клетках линии MDA-MB-231, имеющих на своей поверхности эстрогеновые рецепторы. J. Fujimoto и соавторы [5] обнаружили, что эстрадиол и прогестерон способны индуцировать экспрессию PAI-1 и его мРНК клетками карциномы эндометрия линии Ishikawa. Однако в ряде экспериментов, проведенных на клетках эндометрия [2] и молочной железы [4], было продемонстрировано, что эстрадиол увеличивал продукцию u-PA. Прием эстрадиола здоровыми женщинами в постменопаузе увеличивал синтез t-PA эндотелиоцитами и его концентрацию в крови, а прогестерон, наоборот, подавлял его продукцию [9].
Целью настоящего исследования изучение компонентов фибринолитической системы в ткани доброкачественных и злокачественных опухолей матки и молочной железы при самостоятельных и сочетанных процессах.
Материалы и методы исследования
Были исследованы образцы тканей солитарных злокачественных опухолей молочной железы (РМЖ, n=24) и эндометрия (РТМ, n=21), доброкачественных опухолей – узловой формы фиброзно-кистозной мастопатии (ФКБ, n=15) и миомы матки (n=14), а также при синхронно развивающемся раке молочной железы и миомы матки (n=12, полученные при оперативном лечении больных. В качестве контрольных образцов использовали ткань молочной железы (n=16), полученную во время операций по поводу редукции молочных желез и незатронутую опухолевым процессом ткань эндометрия, полученную при оперативном лечении больных миомой матки (n=14).
В 10 % цитозольных фракциях, приготовленных на калий-фосфатном буфере рН 7.4, содержащим 0,1 % Твин-20 и 1 % БСА определяли активность плазмина (П), содержание и активность ингибитора плазминогена урокиназного типа (uPA а\г и акт), ингибитора плазминогена тканевого типа (tPA а\г и акт) методом твердофазного иммуноферментного анализа (Technoclone, США) и активность плазминогена (ПГ) спектрофотометрическим методом (ACTICHROME PLG, США).
Статистический анализ результатов проводили с помощью пакета Statistica (версия 8). Оценка достоверности произведена с использованием t-критерия Стьюдента. Уровень Р<0,05 принимали как значимый.
Результаты исследования и их обсуждение
Во всех исследованных образцах опухолей были обнаружены uPA и tPA (табл.). В злокачественных опухолях молочной железы при солитарном варианте ее роста общая концентрация uPA оказалась в 6,5 раза выше, чем в неизмененной ткани молочной железы, а активность uPA в опухоли превышала его концентрацию в неизменной ткани в 4,5 раза. Концентрации tPA в опухолях 75 % больных превышала значения в гистологически неизмененных тканях в 2,1 раза, а активность tPA в опухолях 87,5 % больных была выше, чем в интактной ткани в 1,5 раза. В ткани доброкачественной опухоли при узловой форме ФКБ концентрации общего tPA и его активность не имели достоверных отличий от показателей в ткани интактной молочной железы. Вместе с тем, уровень и активность uPA в этих образцах была повышенной в среднем в 2,2 раза. В исследовании Е.С. Герштейн [1] uPA обнаруживается во всех образцах рака молочной железы, а tPA – в опухолях 75 % больных, при этом концентрация uPA в опухолях-в 3,9 раза выше, а tPA достоверно не отличается от показателей в неизмененной ткани молочной железы. Наши результаты в целом согласуются с данными литературы, но и имеют отличительные черты. Описанной автором зависимость изменений активаторов плазминогена была нами выявлена только в ткани опухоли при узловой форме ФКБ.
При сочетании рака молочной железы и миомы матки в ткани рака молочной железы уровень общего uPA превышал нормативные показатели в 10,6 раза, а его активность – в 5,5 раза. Концентрации общего tPA в 75 % образцов была выше значений в интактной ткани молочной железы в 3,8 раза, а активность tPA – 2,7 раза. В ткани миомы матки при сочетанной патологии уровень общего uPA и его активность достоверно не отличались от значений в интактном миометрии, а уровень общего tPA и его активность превышали нормативные показатели в 1,8 раза и 1,5 раза соответственно. При этом в ткани миомы при самостоятельном варианте роста уровни и активности uPA и tPA не имели достоверных отличий от значений в интактной ткани.
Полученные результаты указывали на то, что в ткани рака молочной железы при обоих вариантах, а также в ткани рака эндометрия и миомы матки при сочетанной патологии равновесие в системе плазминоген-плазмин было сдвинуто вправо, т.е. протекал процесс активного образования плазмина из плазминогена. Известно, что наиболее адекватные сведения о функционировании каскадов ферментов, участвующих в основных морфо-функциональных процессах организма, дают не абсолютные величины их активности, а их соотношение. Коэффициент соотношения плазминоген/плазмин (ПГ/П) оказался сниженным в тканях рака молочной железы при самостоятельном процессе и сочетании с миомой матки в 2,7 раза и 3,3 раза соответственно, а также в ткани рака эндометрия – в 2,7 раза. Это подтвердило предположение об активном образовании плазмина, протекающем в указанных образцах, очевидно, на фоне деградации ингибиторов плазмина.
Но особый интерес и в этом случае привлекла ткань миомы матки при различных вариантах развития процесса. Так, в ткани миомы при самостоятельной опухоли значения коэффициента ПГ/П не имели достоверных отличий от показателя в интактной ткани миометрия, несмотря на повышенную абсолютную активность плазминогена и плазмина – в среднем 1,8 раза выше нормативных значений. Такая ситуация свидетельствует о повышенном, но уравновешенном синтезе компонентов тканевой фибринолитической системы, не приводящем к избыточному образованию плазмина, что в свою очередь влечет расщепление базальной мембраны и активацию факторов роста эндотелия сосудов, эпидермальных факторов роста и других маркеров пролиферативной активности ткани. В ткани миомы при самостоятельном варианте роста не были активированы активаторы плазминогена, Вместе с тем в ткани миомы матки при ее сочетании со злокачественной опухолью молочной железы величина коэффициента ПГ/П была снижена как относительно нормативных показателей, так и относительно ткани миомы при самостоятельном варианте роста в среднем в 3,2 раза и достоверно не отличалась от значений в ткани рака эндометрия.
Содержание компонентов фибринолитической системы в тканях опухолей матки и молочной железы
|
Показатель |
Интактная ткань молочной железы |
Интактная ткань миометрия |
Интактная ткань эндо- метрия |
Самостоятельные опухоли молочной железы |
Самостоятельные опухоли тела матки |
Полинеоплазия (рак молочной железы+миома матки) |
|||
|
РМЖ |
ФКБ |
РТМ |
миома матки |
РМЖ |
миома матки |
||||
|
u-PA (акт) Ед./г тк |
0,22±0,02 |
0,9±0,05 |
0,7±0,05 |
1,0±0,11 |
0,5±0,031,2 |
1,1±0,11 |
0,9±0,072 |
1,2±0,081 |
0,8±0,06 |
|
u-PA (а\г) нг/г тк |
1,9±0,15 |
6,4±0,37 |
7,7±0,48 |
12,4±1,11 |
4,2±0,351,2 |
27,0±2,31 |
7,0±0,522 |
20,1±1,61,3 |
5,2±0,421,3 |
|
t-PA(акт) Ед./г тк |
7,4±0,52 |
23,2±1,9 |
22,4±2,0 |
11,4±0,81 |
8,4±0,62 |
52,8±3,61 |
23,7±2,22 |
20,2±1,51,3 |
32,4±2,81,3 |
|
t-PA(а\г) нг/г тк |
16,0±1,3 |
69,1±5,7 |
96,9±4,9 |
33,1±2,61 |
16,6±1,52 |
142,7±13,81 |
67,6±4,22 |
61,1±5,11,3 |
122,8±10,51,3 |
|
Плазминоген, мМ/г тк |
1,7±0,2 |
1,3±0,1 |
1,5±0,08 |
2,9±0,31 |
2,1±0,21,2 |
2,0±0,151 |
2,3±0,21 |
2,1±0,171,3 |
2,2±0,31 |
|
Плазмин мкМ/г тк |
8,1±0,7 |
5,1±0,3 |
7,0±0,4 |
36,8±2,71 |
4,8±0,51,2 |
25,5±1,61 |
9,0±0,731,2 |
33,0±2,91 |
33,1±2,31 |
|
коэффициент ПГ/П |
209,9±31,4 |
254,9±18,9 |
214,3±14,2 |
78,8±6,41 |
437,5±39,31,2 |
78,4±5,21 |
255,5±21,72 |
63,6±4,91,3 |
68,8±5,21,3 |
Примечание. 1 – достоверно по отношению к соответствующей интактной ткани; 2 – достоверно по отношению к ткани злокачественной опухоли; 3 – достоверно по отношению к ткани соответствующей солитарной опухоли.В ткани рака эндометрия уровень и активность превышали нормативные показатели в 3,5 раза и 1,6 раза соответственно, уровень и активность tPA – в 1,5 раза и 2,4 раза соответственно.
Таким образом, компоненты тканевой фибринолитической системы можно рассматривать как надежные маркеры процессов, происходящих в злокачественной опухоли на этапах ее роста, а, возможно, и гибели.