Проблема снижения иммунологической реактивности населения представляет интерес для врачей практически всех специальностей, поскольку в настоящее время у большинства больных с соматической, хирургической и гинекологической патологией обнаруживается иммунодефицит, выраженный в той или иной степени.
Известно, что иммунная недостаточность проявляется нарушением функционирования клеточного и гуморального звеньев иммунитета и возникает в результате воздействия на организм различных факторов [2].
На сегодняшний день одной из основных причин развития пренатальных форм иммунодефицитов считается нарушение иммунного гомеостаза у матери во время беременности [3]. Даже относительно слабые воздействия отрицательных факторов, которые, казалось бы, не должны вызывать структурные и функциональные изменения в органах, в итоге приводят к нарушениям нейроэндокринных и нейрохимических механизмов регуляции [4].
Благоприятный исход беременности и родов, а также здоровье новорожденного в значительной степени зависит как от воздействия внешних факторов, так и от внутренних, то есть наследственных. В антенатальном периоде доминирует внутренний фактор, а влияния внешнего опосредуются материнским организмом. К одному из таких факторов можно отнести и удаление селезенки у будущей матери еще до наступления беременности. В наших предыдущих работах было показано, что удаление селезенки приводит к развитию акцидентальной инволюции тимуса и угнетению иммунитета [7].
Хотя с другой стороны и сама беременность является физиологическим иммунодефицитным состоянием: даже у здоровой беременной женщины наблюдается пониженная устойчивость к инфекциям и обострение симптоматики аутоиммунных заболеваний [1]. Беременность, которая возникла в состоянии вторичного иммунодефицита, оказывает негативное влияние на здоровье не только матери, но и ее потомства.
Несомненно, проблема антенатальной охраны потомства на сегодняшний день является актуальной, особенно на фоне прогрессирующего снижения деторождения и демографических показателей, увеличения перинатальной патологии и заболеваемости новорожденных.
Цель исследования – изучить морфофункциональные особенности селезенки и тимуса потомства крыс с иммунодефицитной беременностью.
В качестве экспериментальной модели врожденного иммунодефицита была выбрана спленэктомия, которая производилась взрослым половозрелым нелинейным крысам-самкам за 30 суток до подсаживания к ним самца.
Исследование проведено на 40 неполовозрелых нелинейных крысах-самцах, разделенных на две группы: 1 – интактные крысята, родившиеся от здоровых самок (n=20), 2 – крысята, родившиеся от спленэктомированных самок (n=20). От крысят обеих групп забирали тимус и селезенку, затем изготавливали криостатные срезы толщиной 10 мкм. В работе использовались:
1. Люминесцентно-гистохимический метод Фалька-Хилларпа в модификации Е.М. Крохиной – для избирательного выявления серотонина и катехоламинов и метод Кросса, Эвена, Роста – для идентификации гистаминсодержащих структур тимуса и селезенки.
2. Метод цитоспектрофлуориметрии – для количественной оценки уровней серотонина (СТ), катехоламинов (КА) и гистамина (ГСТ) в структурах тимуса и селезенки. Измерения производили с помощью насадки ФМЭЛ-1А, установленной на люминесцентный микроскоп ЛЮМАМ-4 при выходном напряжении 600 В.
3. Для характеристики суммарно-направленного действия биогенных аминов вычислялось соотношение (гистамин+серотонин)/катехоламины, свидетельствующее о функциональном состоянии клеток органов.
4. Окраска гематоксилином и эозином с последующей морфометрией.
5. Морфометрический метод с использованием программы Микро-Анализ для измерения размеров люминесцирующих гранулярных клеток, толщины коркового и площади мозгового вещества тимуса, для высчитывания индекса коры – К/М индекс (соотношение площади коркового и мозгового вещества).
6. Статистическая обработка полученных цифровых данных проведена с помощью пакета программ Microsoft office. В работе приводятся следующие показатели: М – средняя арифметическая величина; m – средняя ошибка средней арифметической величины. Статистическую достоверность определяли критерием Стьюдента (t). Paзличия считались достоверными при р< 0,01.
В процессе исследования нами выявлено, что способность к зачатию и вынашиванию у спленэктомированных самок снижена: лишь 63 % крыс смогли забеременеть и родить. Замечено, что у крыс с удаленной селезенкой рождалось по 5-7 крысят, при этом жизнеспособными из них были лишь 57 %, в то время как здоровая самка приносит в помете 10-12 крысят.
При обработке росто-весовых показателей выявлено, что крысята, родившиеся от спленэктомированных самок, отстают от своих сверстников: наблюдалось снижение массы тела и роста на 10-15 %. Некоторые животные были вялые и с плохим аппетитом.
У этой же группы животных отмечается снижение относительной и абсолютной массы тимуса. При микроскопическом исследовании выявлен выраженный полиморфизм долек тимуса. Это касается и их размеров, и структуры коркового и мозгового вещества.
В ряде долек тимуса опытных животных достоверных отличий в его структуре по сравнению с интактными крысятами не выявлено. Обнаруживаются дольки правильной округлой формы, разделенные между собой соединительнотканными перегородками. В дольке визуализируется темное корковое вещество, расположенное на периферии, и более светлое мозговое вещество в центре.
Большинство долек тимуса крысят, родившихся от спленэктомированных самок, принимают полулунную или вытянутую форму. В части долек дифференцировать корковое и мозговое вещество не представлялось возможным.
Проведенная морфометрия показала, что толщина коркового вещества достоверно увеличивается в 1,4 раза, площадь мозгового – в 1,2 раза по сравнению с группой интактных животных, что привело к возрастанию К/М индекса на 17,6 %.
При сравнении препаратов тимуса крысят выявлено увеличение количества люминесцирующих гранулярных клеток (ЛГК) в дольках тимуса крысят, родившихся от спленэктомированных крыс. При обработке препаратов тимуса по методу Кросса на гистамин выявляется картина «звездного неба». Нами выявлено, что соотношение (ГСТ+СТ)/КА в корковом и мозговом веществе тимуса у крысят, родившихся от спленэктомированных самок, по сравнению с интактными животными достоверно снижается на 20 %, что указывает на стимуляцию функциональной активности этих клеток [7].
При окраске препаратов селезенки гематоксилином и эозином было выявлено, что фолликулы органа у интактных крысят округлые и овальные, имеют четкие границы. У крысят, родившихся от спленэктомированных самок, они имеет разнообразную форму и нечеткие края. Морфометрия показала, что размеры фолликулов потомства самок с удаленной селезенкой значительно меньше: по площади – на 72 %, по периметру – на 51 % и диаметру – на 48 %.
Среднее количество ЛГК в белой и красной пульпе селезенки крысят опытной группы на 44 % меньше, чем у интактных животных. Было выявлено, что во всех люминесцирующих клетках, а также в клетках паренхимы белой и красной пульпы селезенки у крысят? родившихся от спленэктомированных самок, уровень гистамина достоверно повышается в 2 раза. В то же время содержание серотонина и катехоламинов в ЛГК и в паренхиме красной пульпы достоверно снижается почти в 5 раз.
Соотношение (ГСТ+СТ)/КА значительно возрастает в ЛГК красной пульпы, в их микроокружении, а также в лимфоидной паренхиме фолликулов у крысят, родившихся от спленэктомированных самок, что свидетельствует о выраженном снижении их функциональной активности.
Таким образом, установлено, что иммунодефицитная беременность самок серьезно сказывается на цитоморфологическом состоянии тимуса и селезенки крысят. Так, выявленные нами морфофункциональные изменения тимуса в ходе эксперимента свидетельствует о развитии в нем инволютивных процессов, причем эти изменения по своей морфологии схожи с таковыми у спленэктомированных самок.
Известно, что инволюция тимуса – закономерный ответ, имеющий фазовый характер, отражающий функциональную активность структурных элементов тимуса [5]. Некоторые исследователи при формировании акцидентальной инволюции тимуса выделяли пять условных фаз, которые отражали динамику процесса [5, 6]. Согласно нашим данным, у трехмесячных крысят, родившихся от спленэктомированных самок, формируются I и II фазы, что согласуется с данными литературы.
Наблюдаемое изменение биоаминного обеспечения клеток селезенки, снижение функциональной активности ЛГК и клеток паренхимы белой и красной пульпы подтверждает тот факт, что удаление селезенки у крыс-самок приводит к развитию врожденного иммунодефицита у их потомства. Согласно данным литературы, большая часть ЛГК селезенки имеет макрофагальную природу, поэтому можно предположить, что снижение функции моноцитарно-макрофагального звена иммунитета приводит к риску развития инфекционных заболеваний не только у матери после удаления селезенки, но и у потомства [3].