Scientific journal
Advances in current natural sciences
ISSN 1681-7494
"Перечень" ВАК
ИФ РИНЦ = 0,778

IMMUNOLOGIC CHARACTERISTICS OF EFFICIENCY OF LOCAL USE OF RONKOLEUKIN IN CHILDREN WITH PERITONITIS

Tusupkaliev A.B. 1 Baubekov Z.T. 1
1 West Kazakhstan Marat Ospanov state medical university
В основу работы положен анализ наблюдений за 70 пациентами с аппендикулярным перитонитом, находившимися на лечении в клинике детской хирургии ЗКГМУ имени Марата Оспанова в возрасте от 2 до 14 лет. В зависимости от распространенности диффузный перитонит выявлен у 32 детей, и у 48 пациентов диагностирован разлитой перитонит. Все дети были оперированы лапароскопическим методом. Основную группу (группа № 1) составили 38 больных, которым после окончательной санации брюшной полости в забрюшинное пространство правой подвздошной области одномоментно вводился препарат Ронколейкин (до 7 лет – 0,25 мг, старше – 0,5 мг), и в послеоперационном периоде одним из компонентов комплексной терапии являлась регионарная лимфотропная антибактериальная терапия (гентамицин 4–7 мг/кг). В качестве группы сравнения (группа № 2) наблюдалось 42 ребенка, которым в послеоперационном периоде применялась общепринятая антибактериальная терапия. Проведенные исследования показали, что после окончательной санации брюшной полости одномоментное введение в забрюшинное пространство правой подвздошной области Ронколейкина способствует нормализации интерлейкинового статуса к 14 суткам после операции. Примененная методика комплексной оценки иммунного статуса позволила выделить в качестве прогностически значимых показателей: ИРИ, уровень CD4+ и CD8+, уровень секреции ИЛ-1 и ИЛ-2, а также экспрессии ИЛ-1 р и ИЛ-2р.
The analysis of investigations of 70 patients at the age of 2–14 years with appendicular peritonitis having been treated at the clinic of children’s surgery of the West Kazakhstan Marat Ospanov state medical university was taken as for the basis of the work. Due to the prevalence diffuse peritonitis was revealed in 32 children and general peritonitis in 48 patients. All the children were operated by laparoscopic method. The basic group (group № 1) consisted of 38 patients whom after final sanation of the abdominal cavity were introduced at once Rencoleukin preparation into the retroperitoneal region of the right iliac area (before 7 years – 0,25 mgr, older – 0,5 mgr) and during postoperative period regional lymph tropic antibacterial therapy (Gentamicini – 4–7 mgr/kg) was one of the constituents of complex therapy. In the group of comparison (group № 2) 42 children were observed who were receiving general antibacterial therapy. The performed investigations showed that after final sanation of the abdominal cavity simultaneous introduction of Ronkoleukin into retroperitoneal space of the right iliac area facilitated to normalization of interleukin status by the 14th day after the operation. The applied methods of a complex estimation of immune status allowed to distinguish IRI, levels CD4+ and CD8+, level of secretion IL-1 and IL-2 and also expressions IL-1p and IL-2p as forecasting significant indices.
Rencoleukin
peritonitis
laparoscopic

Актуальность. Перитонит характеризуется как хирургический стресс с многофакторностью воздействия, когда к эндогенным стрессорным факторам (инфекция, воспаление) присоединяются экзогенные факторы (наркоз, операционная травма) с выбросом в кровь стресс-гормонов, оказывающих мощное депрессивное воздействие на иммунитет [1, 2, 3]. Данное обстоятельство способствует формированию вторичного иммунодефицита, усугубляющего течение заболевания. В связи с этим комплекс проводимой послеоперационной терапии требует включения иммунокоррегирующих препаратов. Это, в свою очередь, требует применения адекватных иммунологических тестов, которые способны в наибольшей степени способствовать корректному прогнозу эффективности проводимого лечения и исхода заболевания [4, 5].

Цель исследования: иммунологическая оценка местного применения Ронколейкина при перитонитах различного генеза у детей.

Материалы и методы исследования

В основу работы положен анализ наблюдений за 70 пациентами с аппендикулярным перитонитом, находившимися на лечении в клинике детской хирургии ЗКГМУ имени Марата Оспанова в возрасте от 2 до 14 лет. В зависимости от распространенности диффузный перитонит выявлен у 32 детей, и у 48 пациентов диагностирован разлитой перитонит. Все дети были оперированы лапароскопическим методом.

Основную группу (группа № 1) составили 38 больных, которым после окончательной санации брюшной полости в забрюшинное пространство правой подвздошной области одномоментно вводился препарат Ронколейкин (до 7 лет – 0,25 мг, старше – 0,5 мг), и в послеоперационном периоде одним из компонентов комплексной терапии являлась регионарная лимфотропная антибактериальная терапия (гентамицин 4–7 мг/кг). В качестве группы сравнения (группа № 2) наблюдалось 42 ребенка, которым в послеоперационном периоде применялась общепринятая антибактериальная терапия.

Всем больным на 1-е, 3-е, 7-е и 14-е сутки проводили исследования по оценке иммунного статуса, которые включали определение количества CD3+, CD4+, CD8+, CD20+, с помощью моноклональных антител производства ООО «Сорбет» (Россия); оценку функциональной активности Т-лимфоцитов по проценту потребления глюкозы (ППГ) в реакции бласттрансформации лимфоцитов (РБТЛ); расчет иммунорегуляторного индекса (ИРИ = CD4+/CD8+), определение уровней сывороточных иммуноглобулинов основных классов А, М, G, исследование фагоцитарной активности нейтрофилов с использованием тест-культуры стафилококка и определением фагоцитарного индекса (ФИ %) нейтрофилов, способных к фагоцитозу, и фагоцитарного числа (ФЧ) – числа микробов, поглощенных одним нейтрофилом [6].

Определение продукции ИЛ-1, ИЛ-2 и их рецепции проводили с использованием в качестве тест-системы лейкоцитарной взвеси периферической крови (ПК) человека, лишенной моноцитов. Сущность метода заключалась в:

1) разделении клеток ПК на клетки-продуценты ИЛ-1 и ИЛ-2 с помощью прилипания к стеклу;

2) получении супернатантов, содержащих ИЛ-1 и ИЛ-2;

3) оценке влияния супернатантов на РБТЛ с ФГА мононуклеарных клеток периферической крови, лишенных моноцитов [7].

Оценка секреции ИЛ-1 и ИЛ-2 проводилась в РБТЛ с ФГА на клетках донорской крови, обработанных супернатантами, содержащими ИЛ-1 и ИЛ-2, выделенными из мононуклеарных клеток больных. Оценка ИЛ-1р и ИЛ-2р осуществлялась аналогичным образом, только в данном случае в РБТЛ использовали клетки больного, обработанные донорскими супернатантами. Результаты оценивали по уровню ППГ. В качестве контроля иммунологических показателей использованы данные, полученные при иммунологическом исследовании 536 здоровых лиц соответствующего возраста. Результаты исследований обработаны методом вариационной статистики с использованием корреляционного анализа.

Результаты исследования и их обсуждение

Иммунный статус большинства больных с перитонитом из обеих групп характеризовался снижением ИРИ: до 2,0 + 0,1 (разлитой перитонит) и 2,8 ± 0,3 (диффузный перитонит). Данное обстоятельство было обусловлено снижением процента содержания CD4+ до 32,4 ± 5,8 % (разлитой перитонит) и до 39,9 ± 4,6 % (диффузный перитонит) при некотором увеличении популяции CD8+ – 26,5 ± 0,9 % (разлитой перитонит) и 24,4 ± 1,1 % (диффузный перитонит). Кроме того, выявлено снижение уровня всей популяции Т-лимфоцитов (CD3+) до 49,1 ± 5,0 % (разлитой перитонит) и 56,3 ± 2,9 % (диффузный перитонит). При этом отмечается снижение ППГ в РБТЛ до 12,6 ± 1,4 % (разлитой перитонит) и 15,0 ± 2,0 % (диффузный перитонит) в основном за счет CD4+. Также отмечено снижение функциональной активности В-лимфоцитов (CD20+), что проявлялось снижением уровня сывороточных иммуноглобулинов JgA (1,1+0,1 г/л и 1,4 ± 0,2 г/л соответственно) и JgG (8,2 ± 0,9 г/л и 9,8 ± 0,87 г/л) и фагоцитарной активности нейтрофилов: ФИ-44,1 ± 3,7 % и 50,6 ± 3,3 %; ФЧ-3,2 ± 0,11 и 4,7 ± 0,09 соответственно.

Нарушение активности Т-, В-звеньев иммунитета и процесса фагоцитоза было выражено в большей степени у пациентов с разлитым перитонитом, что обусловлено более высоким уровнем интоксикации и тяжестью заболевания.

При исследовании интерлейкинового статуса у детей с диффузным перитонитом была выявлена высокая секреция противовоспалительного ИЛ-1 (1,87 ± 0,02) и иммунорегуляторного ИЛ-2 (1,58 ± 0,02) с экспрессией рецепторов ИЛ-1р и ИЛ-2р (1,28 ± 0,15 и 1,35 ± 0,1), в то время как у пациентов с разлитым перитонитом формировался интерлейкинзависимый иммунодефицит со снижением секреции ИЛ-1 и ИЛ-2 (1,2 ± 0,08 и 1,0 ± 0,08) и экспрессии ИЛ-1р и ИЛ-2р (0,9 ± 0,07 и 0,8 ± 0,06). В группе здоровых детей данные показатели составляли: ИЛ-1 = 1,7 ± 0,02; ИЛ-2 = 1,4 ± 0,12; ИЛ-1р = 1,25 ± 0,1 и ИЛ-2р = 1,1+0,09.

Анализ динамики изученных параметров иммунитета в послеоперационном периоде показал, что на 1-е и 3-е сутки после операции не выявилось каких-либо тенденций или достоверных отличий по всем изученным показателям в обеих группах больных. На 7-е сутки, после проведения иммуномодулирующей терапии, в группе сравнения отмечено незначительное повышение содержания CD4+ и CD8+, но без нормализации их баланса. Уровни иммуноглобулинов и фагоцитарная активность нейтрофилов повышались незначительно. Продукция ИЛ-1, ИЛ-2 и экспрессия ИЛ-1р, ИЛ-2р практически не изменялись, в то время как в первой группе детей наблюдалось недостоверное увеличение содержания CD4+ и CD8+ с тенденцией нормализации их баланса. Отмечалось небольшое повышение уровня JgG и усиление фагоцитарной активности нейтрофилов. Продукция ИЛ-1, ИЛ-2 и экспрессия ИЛ-1р, ИЛ-2р повышались без достоверных отличий от исходных данных.

Изученные параметры иммунитета в исследуемых группах детей на 14-е сутки показали, что ИРИ в основной группе соответствовал показателям у здоровых лиц, в то время как в группе сравнения он был достоверно ниже (соответственно 2,3 ± 0,2 и 3,5 ± 0,3).

Кроме того, в основной группе больных констатирована нормализация субпопуляций CD4+ и CD8+, увеличение уровней иммуноглобулинов всех классов, усиление фагоцитарной активности нейтрофилов до нормальных показателей. В то же время в группе сравнения число CD4+ приближается к норме при сохраняющемся высоком уровне CD8+. В данной группе также отмечается увеличение уровней иммуноглобулинов и фагоцитарной активности нейтрофилов.

В отношении цитокинового статуса у больных с перитонитом установлено модулирующее действие одномоментного введения Ронколейкина с последующей регионарной лимфотропной антибактериальной терапией, т.е. снижение до уровня показателей здоровых детей секреции ИЛ-1, ИЛ-2 и экспрессии их рецепторов.

В группе больных, которым не проводилось введение Ронколейкина, установлено только недостоверное снижение секреции ИЛ-1 и особенно ИЛ-2, а также экспрессии ИЛ-1 р, ИЛ-2р.

Выводы

Проведенные исследования показали, что после окончательной санации брюшной полости одномоментное введение в забрюшинное пространство правой подвздошной области Ронколейкина способствует нормализации интерлейкинового статуса к 14 суткам после операции. Примененная методика комплексной оценки иммунного статуса позволила выделить в качестве прогностически значимых показателей: ИРИ, уровень CD4+ и CD8+, уровень секреции ИЛ-1 и ИЛ-2, а также экспрессии ИЛ-1 р и ИЛ-2р.