Научный журнал

Успехи современного естествознания

ISSN 1681-7494

"Перечень" ВАК

ИФ РИНЦ = 0,775

• Авторы
• Резюме
• Файлы
• Ключевые слова
• Литература

Дармограй С.В. 1 Ерофеева Н.С. 1 Филиппова А.С. 1 Дармограй В.Н. 1

---

1 ГБОУ ВПО «Рязанский государственный медицинский университет им. акад. И.П. Павлова» Минздрава России

Изучали растения рода ясколки флоры СНГ, полученные из гербариев этого региона, а также заготовленные в Рязанской области. В настоящем сообщении приводятся результаты исследования некоторых экдистероидных соединений, содержащихся в указанном таксоне, а именно: экдистерона и полиподина B, а также флавоноида виценина, методом хроматографии в тонком слое (ТСХ) на пластинках «Silufol UV 240». Экдистероиды разделяли в системах растворителей хлороформ: спирт этиловый (2:1), (4:1). Для виценина использовалась система бутанол : уксусная кислота : вода (БУВ) 4:1:2 соответственно, в качестве проявителя использовался спиртовой раствор цирконила нитрата основного 1 %. Детектирование экдистероидов на хроматограммах проводили с помощью ванилинсерной кислоты, при действии которой экдистероиды приобретают буро-зеленоватый оттенок при дневном свете, а в УФ-свете – голубоватую флуоресценцию с различными оттенками в зависимости от структуры экдистероидов, виценин на свету приобретает желто-коричневое окрашивание, при проявлении раствором цирконила нитрата в УФ-лучах светится желто-оранжевым цветом. В результате установлено наличие в исследуемых видах небольших количеств экдистероидов и виценина в более высоких концентрациях.

Статья в формате PDF

0 KB

ясколка

Сerastium sp.

полиподин B

экдистерон

виценин

хемотаксономия

ТСХ

1. Дармограй В.Н. Качественное и количественное определение экдистероидов и полифенольных соединений травы ушанки мелкоцветковой (Otites parviflorus Grossh.) / В.Н. Дармограй, Н.С. Ерофеева, С.В. Дармограй, А.С. Филиппова, В.А. Морозова, Г.В. Дубоделова // Успехи современного естествознания. – 2015. – № 12. – С. 21–25.

2. Дармограй В.Н. Фармакогностическое изучение некоторых видов семейства гвоздичных и перспективы их использования в медицинской практике: дис. ... в виде науч. докл. … д-ра фармац. наук: 15.00.02; РязГМУ им. акад. И.П. Павлова. – Рязань, 1996. – 92 с.

3. Зибарева Л.Н., Дайнен Л., Ерёмина В.И. Скрининг видов семейства Caryophyllaceae на присутствие фитоэкдистероидов // Растит. ресурсы. – 2007. – Т. 43, Вып. 4. – С. 66–74.

4. Зоз И.Г. К хемотатаксономии семейства Caryophylla­ceae Juss. / И.Г. Зоз, В.И. Литвиненко, В.Н. Дармограй // Тез. докл. V делегатского съезда Всесоюзн. ботанического о-ва. – Киев, 1973. – С. 149–150.

5. Михеев А.В., Игнатов И.С. Опыт применения экдистероидов в лечении нагноительных заболеваний лёгких и плевры // Наука молодых (Eruditio Juvenium). – 2013. – № 3. – С. 27–33.

6. Флора Восточной Европы. – Т. XI. Коллектив авторов / отв. ред. и ред. тома Н.Н. Цвелёв. – М.: СПб.: Товарищество научных изданий КМК, 2004. – 536 с.; ил.

7. Щулькин А.В. Изучение антигипоксического и антиишемического эффектов фитоэкдистерона // Российский медико-биологический вестник имени академика И.П. Павлова. – 2011. – № 3. – С. 30–36.

8. Novozhilova E., Rybin V., Gorovoy P., Gavrilenko I., Doudkin R. Phytoecdysteroids of the East Asian Caryophyllaceae // Pharmacogn Mag. – 2015 May. – 11 (Suppl 1). – S225–S230.

9. Volodin V.V., Volodina S.O. Floristic and molecular phylogenetic analysis of the distribution of phytoecdysteroids among plants of North-East Russia (Asteraceae and Caryophyllaceae) // Biology and Medicine. – 2015. – № 7(1).

Фитоэкдистероиды – гормоны линьки насекомых – являются перспективным классом биологически активных веществ (БАВ). Многие исследования подтвердили широкий спектр фармакологической активности данных веществ [1, 3, 5, 7]. При этом наличие стероидных соединений в растении является важным хемотаксономическим признаком семейства гвоздичные (Caryophyllaceae Juss.). Род ясколка (Сerastium L.), относящийся к подсемейству алсиновые (Alsinoideae), на сегодняшний день некоторыми исследователями причислен к родам, не содержащим в своем составе экдистероидов [3, 8]. Однако первое упоминание данного рода в числе экдистероидсодержащих представителей семейства гвоздичные было еще в 1996 г. [2]. В 2014 г. нами было установлено, что в траве ясколки полевой (С. arvense L.) содержится фитоэкдистероид экдистен (экдистерон). В качестве примера приводим результаты анализа высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) (рис. 1, табл. 1). Также, методами ВЭЖХ и радиоиммунного анализа (РИА) небольшое содержание экдистероидов было недавно обнаружено в листьях ясколки костенцовой (C. holosteoides) [9].

Помимо фитоэкдистероидов для гвоздичных достаточно характерно наличие флавоноида виценина, представляющего собой 6,8-с-β-D-диглюкопиранозид апигенина и антоцианов [4].

Цель работы – провести анализ гербарных образцов ясколки (Сerastium L.) методом ТСХ на наличие фитоэкдистероидов и полифенольного соединения виценина, используя в качестве образцов-свидетелей спиртовые растворы виценина, полиподина В и экдистерона.

Рис. 1. Хроматограмма ВЭЖХ водно-спиртового извлечения ясколки полевой (С. arvense L.), детектирование при длине волны 254 нм

Таблица 1

Данные, полученные хроматограммой ВЭЖХ водно-спиртового извлечения ясколки полевой (детектирование при длине волны 254 нм)

Таблица 2

Подроды и секции рода ясколки (Сerastium L.)

Материалы и методы исследования

Некоторые виды (C. arvense, C. caespitosum) заготавливались на территории Рязанской области, остальные были получены из гербариев. Исследуемые растения были поделены на секции [6] (табл. 2).

Для проведения ТСХ-анализа на фитоэкдистероиды использовали пластинки «Silufol UV 240», в качестве системы применяли раствор хлороформ: спирт этиловый 4:1, 2:1. В качестве свидетелей использовали спиртовые растворы полиподина и экдистерона. Детектирование экдистероидов на хроматограммах проводили с помощью ванилинсерной кислоты. Исследование на виценин проводилось методом ТСХ на пластинках «Silufol UV 240», в качестве системы использовали бутанол: уксусная кислота: вода (БУВ) 4:1:2 соответственно. В качестве проявителя использовался спиртовой раствор цирконила нитрата основного 1 %.

Для получения извлечения около 0,2–0,5 г образцов растений помещали в пробирки и настаивали, используя в качестве растворителя спирт этиловый 40 % в течение 21 дня. После этого спиртовые извлечения с помощью микрокапилляров наносили на пластинки. Растворы свидетелей наносились таким же образом. После высушивания пластинки в течение 10 мин ее помещали в насыщенную парами системы камеру и ждали, пока фронт растворителя пройдет до конца пластинки, после чего пластинку высушивали в течение 20 мин. Высушенную пластинку просматривали сначала при дневном свете, затем обрабатывали ванилинсерной кислотой, при этом при дневном свете экдистероиды обнаруживались в виде зеленовато-бурых пятен различной интенсивности. После обработки парами аммиака в ультрафиолетовых лучах (УФ-лучах) при длине волны 240 нм экдистероиды приобретали голубой цвет с зеленоватым оттенком, а полиподин В флуоресцировал голубым цветом с лиловым оттенком.

При исследовании на виценин пластинку обрабатывали спиртовым раствором цирконила нитрата основного 1 %, после чего на хроматограмме при дневном освещении были отчетливо видны пятна от желтого до коричнево-бурого цвета в зависимости от концентрации его в извлечении, а в УФ-лучах пятна приобретали яркое оранжево-желтое окрашивание.

Таким образом, нами были получены несколько хроматограмм, в которых спиртовые экстракты растений были разделены по секциям (рис. 2, 3).

Результаты исследования и их обсуждение

На полученных хроматограммах (рис. 2, 3) можно обнаружить небольшие количества экдистероидов, по цвету пятен схожих с пятнами свидетелей. Так как в вытяжке из растения могут содержаться вещества, маскирующие цвет экдистероидов, после детектирования ванилинсерной кислотой мы обрабатывали пластинку парами аммиака, в которых пятна экдистероидов немного изменяли цвет. Таким образом, мы добивались снижения влияния маскирующих агентов. На хроматограммах можно было различить голубоватые пятна, характерные для экдистерона, и лиловато-бурые пятна полиподина.

Наиболее четко пятна экдистероидов на хроматограммах прослеживались в секциях Caespitosa (Pax et K. Hoffm.), Cerastium (Pax et K. Hoffm.), Strephodon (Ser.), при этом в секции № 2 количество экдистероидов по результатам эксперимента было самым высоким (визуальная оценка).

Результаты ТСХ исследования на виценин показали более явные результаты, где на хроматограммах всех секций были отчетливо видны пятна виценина. При этом наиболее яркие пятна имели извлечения растений секции № 2 Cerastium (Pax et K. Hoffm.), однако принадлежащий к ней вид C. alpinum в сравнении с остальными содержал небольшие количества виценина. Секция № 3 Fugatia (Pax et K. Hoffm.) также содержит растения, в которых виценина достаточно много, при этом C. glomeratum содержит большее количество вещества, чем C. glutinosum. В остальных секциях № 1 Caespitosa, № 4 Schizodon было обнаружено небольшое количество виценина в сравнении с остальными секциями, при этом наименее видимые пятна прослеживались в секции № 1. Секция № 5 содержит виценин во всех исследуемых образцах, однако его количество неодинаковое: максимальное у C. maximum и минимальное у C. dahuricum, остальные образцы содержат практически одинаковое количество вещества. Полученные результаты позволяют заключить, что дальнейшее изучение растений данного рода перспективно.

а

б

Рис. 2. Схема хроматограмм растений рода ясколка в системе хлороформ: спирт этиловый 2:1 (а), 4:1 (б). Обозначения: п – полиподин, э – экдистерон; секция № 1: 1 – С. fontanum; 2 – C. holosteoides; 3 – C. сaespitosum; секция № 2: 4 – С. alpinum; 5 – C. arvense; 6 – С. biebersteinii; секция № 3: 7 – С. glomeratum, 8 – C. glutinosum; секция № 4: 9 – С. dichotomium; секция № 5: 10 – С. perfoliatum; 11 – C. maximum; 12 – C. pauciflorum; 13 – C. dahuricum

Рис. 3. Схема хроматограмм растений рода ясколка, полученных в системе БУВ 4:1:2. Обозначения: в – виценин; секция № 1: 1 – C. сaespitosum; 2 – C. holosteoides; 3 – С. fontanum; секция № 2: 4 – С. alpinum; 5 – C. arvense; 6 – С. biebersteinii; 7 – С. glomeratum; 8 – C. glutinosum; 9 – С. dichotomium; 10 – C. maximum; 11 – C. pauciflorum; 12 – C. dahuricum; 13 – С. perfoliatum

Выводы

1. Нами установлено, что некоторые растения рода ясколки (Сerastium L.) семейства гвоздичные (Caryophyllaceae Juss.) содержат фитоэкдистероиды экдистерон и полиподин в небольших концентрациях, максимальное количество которых было обнаружено в секции № 2 Cerastium.

2. Исследуемые нами образцы растений рода во всех секциях имеют в своем составе виценин, наибольшее содержание которого наблюдалось в секции № 2 Cerastium.

Библиографическая ссылка